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研究lncRNA功能的新方法

閱讀:801發(fā)布時間:2014-9-11

 

長非編碼RNAlncRNA)是長達兩百個核苷酸以上的轉(zhuǎn)錄本。雖然lncRNA沒有編碼任何蛋白質(zhì),但它們在不同組織和發(fā)育階段的表達依然具有特異性,這說明lncRNA具有重要的生物學意義。細胞中絕大多數(shù)lncRNA位于細胞核,它們對應的DNA區(qū)域有的與蛋白編碼基因重疊,有的位于基因間或者內(nèi)含子中。

只有在結(jié)構域的水平上進行研究,才能夠深入理解lncRNA的功能。問題是人們一直沒有找到合適的方法。

研究人員首先設計了*化的反義寡核苷酸池,來靶標lncRNA的特定結(jié)構域。隨后,他們通過交聯(lián)保護了細胞中的lncRNA互作,并利用超聲處理可lncRNA片段化,形成結(jié)構域大小的片段。(延伸閱讀:從互作揭開lncRNA的秘密)

研究人員將*化的寡核苷酸添加到不同的染色質(zhì)樣本中,使它們發(fā)生雜交。zui后通過鏈霉親和素磁珠,將lncRNA結(jié)構域連同它的互作搭檔一起純化出來。對這些純化產(chǎn)物進行分析(WB、逆轉(zhuǎn)錄定量PCR、定量PCR或者測序),就可以鑒定RNA-蛋白、RNA-RNARNA-染色質(zhì)的互作。

研究團隊使用dChIRP技術研究了一種稱為roX1lncRNA,這是雄性果蠅劑量補償效應所需的lncRNA。雄性果蠅只有一個X染色體,其上的基因會出現(xiàn)加倍表達,這種現(xiàn)象就稱為劑量補償效應。這項研究揭示了roX1功能域的組成結(jié)構,向人們展示了由三個不同結(jié)構域組成的三指手掌結(jié)構。其中的三個指狀結(jié)構域負責與染色質(zhì)互作,是功能獨立的RNA亞單位。

 


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