ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。此項技術(shù)自70年代初問世以來，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。

　　溫育是ELISA 測定中影響測定成敗zui為關(guān)鍵的一個因素。

　　溫育所需時間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時間相對較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。 溫育這一步是臨ELISA 測定中zui容易出現(xiàn)問題的步驟。通常目前國內(nèi) ELISA 商品試劑盒的反應(yīng)溫育時間為37℃ 30分鐘～1小時， 則通常為37℃ 1～2小時才能有較*的結(jié)合，低于1小時，可能會影響測定下限。

　　操作注意事項

　　1、要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時間 一般來說，加完樣本和（或）反應(yīng)試劑后，將 微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時，孔內(nèi)溫度從室溫升37℃，需要一定的時間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時間可能還比較長，而在臨床實驗室中，很少有天 室內(nèi)溫度較低有關(guān)，此時微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時間不夠，以致弱陽性樣本測定為陰性。

　　2、溫育溫度的選擇 在有的ELISA 試劑盒的說明書中，指出溫育溫度可有兩種，例如，一種是37℃下1h，另一種則為43℃下45min。因此，我們建議在臨床 ELISA 測定中盡量使用較低溫育溫度較長反應(yīng)時間的條件。

　　3、在實驗室的常規(guī)ELISA 測定中，將板從室溫（通常在25℃左右）臵于37℃溫箱， 板孔升溫時，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時，將板和溶液均加。