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COS-7SV40 轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞

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產(chǎn)品型號

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廠商性質(zhì)代理商

所在地上海市

更新時間:2016-12-05 23:03:52瀏覽次數(shù):186次

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COS-7SV40 轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)COS-7SV40 轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細胞
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。

其他*產(chǎn)品:
TetraethylaMMoniuM bis[1,2-benzenediolato(2-)-O,O  53992-92-0
TetraethylaMMoniuMnitrat  1941-26-0
TETRAETHYLENE GLYCOL DIMETHYL ETHER  143-24-8
Tetraethyleneglycol Monododecyl ether 四聚乙二醇單月桂醚 5274-68-0
TetraethylfluoroMethylene-diphosphonate 四乙基氟代亞甲基二磷酸酯 78715-56-7
Tetraethyllead  78-00-2
Tetraethyltin  597-64-8
tetraglycerol 聚ganyou-4 56491-53-3
tetraheptyltin  57055-26-2
TETRAHYDROFURAN-2-AMINE  127662-20-8
TETRAHYDRO-2-FURANCARBOXALDEHYDE. 四氫-2-呋喃甲醛 7681-84-7
Tetrahydro-2H-pyran-4-carbonyl chloride 四氫吡喃-4-甲酰氯 40191-32-0
Tetrahydro-2H-thiopyran-4-ol 四氫-2H-硫代吡喃-4-醇 29683-23-6
TETRAHYDRO-3-FUROIC ACID 3-四氫呋喃甲酸 89364-31-8
Tetrahydro-4H-Pyran-4-one  143562-54-3
tetrahydro-4h-pyran-4-one 四氫吡喃-4-醇 2081-44-9
Tetrahydro-4H-pyran-4-one 29943-42-8
Tetrahydro-4H-thiopyran-4-one 四氫噻喃-4-酮 1072-72-6
tetrahydrofuran-3-aMine hydrochloride 3-氨基四氫呋喃鹽酸鹽 204512-94-7
Tetrahydropyran-2-ylMethylaMine 2-甲胺基四氫吡喃 6628-83-7
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則  慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。

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