Dami巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞 上海谷研科技有限公司的原代細(xì)胞株及血清,ATCC細(xì)胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細(xì)胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體)Dami巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞:
(1) 收集1×106個細(xì)胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細(xì)胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細(xì)胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細(xì)胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細(xì)胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細(xì)胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細(xì)胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細(xì)胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細(xì)胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細(xì)胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細(xì)胞;固定待測。
(7)流式細(xì)胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細(xì)胞。
細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細(xì)胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細(xì)胞濃度為106細(xì)胞/毫升,取1毫升細(xì)胞懸液,用PBS洗三次,細(xì)胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進(jìn)行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
2-[2-(2-AMINOETHOXY)ETHOXY]ETHANOL 2-[2-(2-AMINOETHOXY)ETHOXY]ETHANOL 6338-55-2
2-[2-(2-Azidoethoxy)ethoxy]ethanaMine 2-[2-(2-疊氮乙氧基)乙氧基]乙胺 166388-57-4
2-[2-(2-Fluoroethoxy)ethoxy]ethanol 373-45-5
3,6,9- Trioxydecanoic acid (TODS) 2-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基)乙酸 16024-58-1
Quetiapine * 111974-69-7
2-[2,6-bis(2-diethylaMinoethyloxy)phenoxy]-N,N-diethylethanaMine 153-76-4
2-[2-[2-T-BOC-AMINOETHOXY]ETHOXY]ETHYL BROMIDE 165963-71-3
2-[3-(2,6-Dichlorophenyl)-5-Methylisoxazol-4-yl]acetonitrile 519056-44-1
2-[3-Methyl-4-(2,2,2-trifluoroethoxy) -2-pyridinyl]Methylthio-1H-benziMidazole 2-[3-甲基-4-(2,2,2-三氟乙氧基)-2-吡啶]甲基硫基-1H-苯并咪唑 103577-40-8
2-[4-(2-HYDROXY-2-METHYLPROPYL)PHENYL]PROPIONIC ACID 51146-55-5
2-[4-(DIETHOXYPHOSPHORYLMETHYL)PHENYL]BENZOTHIAZOLE 福司地爾 75889-62-2
2-[4-oxido-4-[3-[2-(trifluoroMethyl)phenothiazin-10-yl]propyl]-2,3,5,6 -tetrahydropyrazin-1-yl]ethyl decanoate 76013-31-5
PactiMib 7-[(2,2-二甲基-1-氧代丙基)氨基]-2,3-二氫-4,6-二甲基-1-辛基-1H-吲哚-5-乙酸 189198-30-9
2-[bis(2-chloroethyl)aMino]acetic acid 98486-41-0
20 Mg 90640-80-5
20(S)-ginsenoside F1 人參皂苷 F1 53963-43-2
20(S)-GINSENOSIDE-RH2 20(S)-人參皂苷RH2 7821-33-2
200000.000 KG 十二氫苯并菲 1610-39-5
dicesiuM luride 12191-06-9
5-[1-Methyl-1-[4-(oxiranylMethoxy)phenyl]ethyl]-2-(oxiranylMethoxy)benzyl alcohol 3188-83-8
2092-56-0 2092-56-0
20g 1,1,1,3,3,5,5-七甲基三硅氧烷 2895-07-0
Pentobarbitone 戊* 76-74-4
20R-Ginsenoside Rh2 20(R)-人參皂苷 RH2 112246-15-8
2'3'-Dideoxyadenosine 5'-triphosphate sodiuM salte (ddATP) 178451-61-1
細(xì)胞凍存
1.將細(xì)胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細(xì)胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
暫無信息 |