谷研試劑-裂解細(xì)胞

          elisa試劑盒可以采用多種不同的方法裂解組織，依據(jù)所研究的細(xì)胞或組織的類型不同以及抗原的zui終用途選擇適當(dāng)?shù)姆椒?。?duì)無(wú)細(xì)胞壁的細(xì)胞用溫和的去污劑即可溶解。反之，則需采用某些機(jī)械的剪切或酶消化法來(lái)去除細(xì)胞壁。如果經(jīng)過(guò)zui后處理的抗原不需保持完好的三維結(jié)構(gòu)或生化活性，細(xì)胞可在比較劇烈的變性條件下裂解，然后將變性劑稀釋，再加入特異性抗體。

             elisa試劑盒許多提取條件均可以使各種蛋白酶釋放，若釋放到裂解液內(nèi)的蛋白酶其消化作用影響免疫沉淀，則可采取兩種方法減弱其作用。首先，必須保持標(biāo)本冷卻，因溫度可影響大多數(shù)蛋白酶的降解速度。其次，可在溶解緩沖液內(nèi)加入蛋白酶抑制劑。以下為常用的蛋白酶抑制劑，其中aporotinin和苯甲基磺酰氟化物(PMSF)zui常用。但是幾種蛋白酶抑制劑混合使用，特別是作為進(jìn)一步試驗(yàn)的起點(diǎn)時(shí)，這樣有助于確定該抗原的*抑制劑。

    其他來(lái)源細(xì)胞的裂解    幾乎所有來(lái)源的材料均可作為免疫沉淀的起點(diǎn)，包括不同來(lái)源的整個(gè)器官、冰凍的組織塊、血樣、層析柱分部洗脫液或環(huán)境樣本。若樣本要求裂解細(xì)胞以釋放抗原，則是進(jìn)行一系列對(duì)照實(shí)驗(yàn)以確定的提取方法?？傊?，其原則是在釋放盡可能多抗原，引起盡可能少的蛋白變性的前提下將可溶性抗原從顆粒基質(zhì)中分離出來(lái)，而且要避免或消除大分子DNA進(jìn)入溶液。裂解液的量要減少至壓積細(xì)胞量的10倍，在允許的情況下可增加至50—100倍。zui后應(yīng)注意的是所有的操作在冰上進(jìn)行，保持盡可能低的溫度以減少所釋放的蛋白酶降解抗原的能力。另外，除非有特殊要求，推薦使用蛋白酶的抑制劑。