谷研試劑-T、B細(xì)胞表型抗體免疫組化敏感性與特異性分析

摘要　目的：探討T、B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤免疫表型染色的特異性和交叉反應(yīng)性。方法：應(yīng)用S-P免疫組織化學(xué)方法對(duì)62例非霍奇金淋巴瘤進(jìn)行CD20、CD74、CD45RO、CD43和CD3免疫表型測(cè)定。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞表型抗體CD20和CD74對(duì)B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤染色陽(yáng)性率達(dá)88.2%～100%，但CD74的特異性不強(qiáng)，與T細(xì)胞有26.7%(4/15)～35.7%(5/14)的交叉反應(yīng)，而CD20表現(xiàn)出高度的特異性，交叉反應(yīng)為0。T細(xì)胞表型抗體CD45RO、CD43和CD3對(duì)T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤染色陽(yáng)性率達(dá)85.7%～100%，但CD45RO和CD43對(duì)B細(xì)胞的交叉反應(yīng)高達(dá)40%(6/15)～47.1%(8/17)，特異性不強(qiáng)，而多克隆抗體CD3與B細(xì)胞僅有5.9%(1/17)的交叉反應(yīng)，表現(xiàn)出明顯的特異性。結(jié)論：提示在進(jìn)行T、B細(xì)胞免疫表型劃分時(shí)，應(yīng)使用一組包括CD20、CD74，CD45RO、CD43和CD3等抗體，CD3是一種具有高度敏感性和高度特異性的T細(xì)胞標(biāo)志抗體，值得推薦。
關(guān)鍵詞　淋巴瘤，B細(xì)胞；淋巴瘤，T細(xì)胞；免疫表型分型；免疫組織化學(xué)
中國(guó)圖書(shū)分類號(hào)　R733.4； R392　　文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼　A　　文章編號(hào)　1001-7399（1999）01-0015-03

Specifity and reactivity of antibodies of B-cell and T-cell immunophenotype

1Chen Linying, 1Zhang Sheng, 2Wang Xiaoya
(1Dept of Pathol, First Affiliated Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou　350005; 2Fuzhou Maxim Biotech Inc, Fuzhou　350002)

ABSTRACT　Purpose　To investigate the specificity and reactivity of antibodies of B-cell and T-cell of NHL. Methods　Sixty-two cases of NHL were examined for CD20、CD74、CD45RO、CD43 and CD3 using S-P immunohistochemical methods. Results　The positivity rates of CD20 and CD74 in B-cell NHL were 88.2%～100%， and the reactivity of CD74 with 26.7%～35.7% of T-cell NHL suggested that it may lack specifity; However, CD20 as high specificity as its cross-reactivity was zero. The staining rates of CD45RO，CD43 and CD3 with T-cell were 85.7%～100%. The cross-reactivity of CD45RO and CD43 with B-cell was 40%～47.1% and their specificities were lack, but the polyclonal CD3 only reacted with 5.9%(1/17) B-cell NHL and had very high specificity. Conclusion　For determination of B-cell and T-cell immunophenotyping a panel of antibodies comprising CD20、CD74，CD45RO，CD43 and CD3 is recommended. CD3 is a antibody of T-cell marker with high sensitivity and specificity.
KEY WORDS　lymphoma, B-cell; T-cell; lymphoma; immunophenotyping; immunohistochemistry

非霍奇金淋巴瘤的分類方法很多，通常以Lukes-Collins免疫功能分類為基礎(chǔ)，也即以現(xiàn)代免疫學(xué)觀念和新技術(shù)用于淋巴瘤的研究，產(chǎn)生以形態(tài)學(xué)與功能相結(jié)合的免疫功能分類，即將非霍奇金淋巴瘤分為B細(xì)胞、T細(xì)胞和組織細(xì)胞三大類的不同亞型。的表型劃分對(duì)于惡性淋巴瘤的正確分類是非常重要的。通常是用一組可用于石蠟切片的抗體對(duì)淋巴瘤進(jìn)行免疫分型，這包括許多種能識(shí)別B或T細(xì)胞抗原的試劑，包括CD20、CD74、CD43、CD45RO和CD3等抗體。然而其中有些為大家所常用的淋巴瘤分類抗體，在進(jìn)行免疫組化染色時(shí)表現(xiàn)很強(qiáng)的交叉反應(yīng)性，這種現(xiàn)象很大程度上困擾著我們對(duì)淋巴瘤的分類。本文應(yīng)用一組B、T細(xì)胞淋巴瘤，對(duì)這些試劑免疫組化染色的敏感性和特異性進(jìn)行分析。

1　材料和方法

1.1　組織標(biāo)本　收集福建醫(yī)科大學(xué)附屬*醫(yī)院1994～1998年常規(guī)活檢標(biāo)本62例，常規(guī)福爾馬林固定，24 h內(nèi)取材，4 μm厚連續(xù)切片，經(jīng)病理診斷為淋巴瘤，參照修正后的Kiel分類方法〔1〕。
1.2　試劑　CD20(L26)，CD74(LN2)，CD3(多克隆)，CD45RO(UCHL1)，CD43(MT-1)抗體及S-P(廣譜)試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Maxim Biotech公司(由福州邁新公司提供)，操作按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。
1.3　微波抗原修復(fù)　組織切片常規(guī)脫蠟至水化，用微波爐(National家用微波爐)行抗原修復(fù)。先用中檔4～6 min對(duì)檸檬酸緩沖液進(jìn)行升溫，待見(jiàn)到輕度沸騰后即用中低檔保溫10 min(可見(jiàn)到微小氣泡)；一抗孵育2 h(室溫25℃左右)，常規(guī)DAB-H2O2顯色8 min，蘇木素復(fù)染。

2　結(jié)果

本組62例非霍奇金淋巴瘤患者，年齡19～77歲，平均46.4歲，其中男性37例，女性25例。按修正后的Kiel分類法，B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤33例，其中低度惡性17例，高度惡性16例；T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤29例，其中低度惡性14例，高度惡性15例。
總體觀察微波抗原修復(fù)染色結(jié)果，在所有病例中免疫組化陽(yáng)性染色為帶有微弱的漿染色、細(xì)胞膜染色，組織結(jié)構(gòu)清晰，未見(jiàn)明顯背景染色。
62例非霍奇金淋巴瘤行免疫組化染色結(jié)果(圖1～8)。

圖1 低度惡性B細(xì)胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD20染色陽(yáng)性。S-P×400

圖2 低度惡性B細(xì)胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD3染色陰懷。S-P×400

圖3 高度惡性B細(xì)胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD20染色陽(yáng)性。S-P×400

圖4 高度惡性B細(xì)胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD3染色陽(yáng)性。S-P×400

圖5 低度惡性T細(xì)胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD20染色陽(yáng)性。S-P×400

圖6 低度惡性T細(xì)胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD3染色陽(yáng)性。S-P×400

圖7 高度惡性T細(xì)胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD20染色陽(yáng)性。S-P×400

圖8 高度惡性T細(xì)胞非霍奇金惡性淋巴瘤CD3染色陽(yáng)性。S-P×400

2.1　B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤　17例低度惡性的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中，B細(xì)胞表型標(biāo)志的CD20和CD74染色陽(yáng)性率分別達(dá)94.1%(16/17)，88.2%(15/17)；而作為T細(xì)胞表型標(biāo)志的CD45RO，CD3和CD43對(duì)B細(xì)胞的染色交叉率分別為44.2%(7/17)，5.9%(1/17)，47.1%(8/17)。
16例高度惡性的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中，CD20和CD74染色陽(yáng)性率分別達(dá)100%；而CD45RO、CD3和CD43對(duì)B細(xì)胞的染色交叉率分別為43.7%(7/16)，0(0/15)，40.0%(6/15)。
2.2　T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤　14例低度惡性的T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中，作為T細(xì)胞表型標(biāo)志的CD45RO、CD3和CD43陽(yáng)性染色率分別為85.7%(12/14)，100%(14/14)，100%(14/14)；而作為B細(xì)胞表型標(biāo)志的CD20和CD74對(duì)T細(xì)胞的染色交叉率為0(0/14)和35.7%(5/14)。
15例高度惡性的T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中，CD45RO；CD3和CD43 陽(yáng)性染色率分別為100%(15/15)，86.7%(13/15)，93.3%(14/15)；而CD20和CD74對(duì)T細(xì)胞染色交叉率為0(0/15)和26.7%(4/15)。
在對(duì)B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤染色中，CD20和CD74的染色陽(yáng)性率可達(dá)88.2%～100%，T細(xì)胞標(biāo)志的CD45RO和CD43 對(duì)B細(xì)胞的染色交叉率高達(dá)40%～47.1%；僅對(duì)CD3在17例低度惡性的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中的1例陽(yáng)性染色，在高度惡性的B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中CD3未見(jiàn)染色交叉性。
在對(duì)T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤的染色中，CD45RO、CD3和CD43 的染色陽(yáng)性率可達(dá)85.7%～100%；B細(xì)胞標(biāo)志的CD20對(duì)T細(xì)胞的染色交叉率為0，但CD74對(duì)T細(xì)胞的染色交叉率達(dá)26.7%～35.7%。

3　討論

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)于B細(xì)胞免疫表型染色的CD20和CD74是兩種敏感性很強(qiáng)的標(biāo)志物，同時(shí)CD20具有高度的特異性，CD20對(duì)T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤的染色交叉率為0。但CD74對(duì)淋巴瘤的免疫表型特異性不強(qiáng)，與低度惡性(5/44)和高度惡性（4/15）的T細(xì)胞淋巴瘤有染色交叉性。
同樣對(duì)于T細(xì)胞免疫表型的染色來(lái)說(shuō)，CD45RO、CD3和CD43具有高度的敏感性，染色率達(dá)到85.7%～100%；但為大家所常用的CD45RO和CD43在對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤進(jìn)行免疫分型時(shí)其染色的交叉性高達(dá)40%～47.1%，特異性不強(qiáng)；相反多克隆的CD3卻表現(xiàn)出明顯的特異性，僅1例濾泡中心性淋巴瘤有較弱的膜染色。
許多研究〔2，3〕表明，任何單*種的淋巴細(xì)胞標(biāo)志物均不可能在所有的淋巴瘤病例中都呈現(xiàn)出100%的陽(yáng)性染色，我們的結(jié)果與此相似，CD20和CD74對(duì)B細(xì)胞染色率為88.2%～100%，CD45RO、CD3和CD43對(duì)T細(xì)胞的染色率為85.7%～100%。Kreft等〔4〕發(fā)現(xiàn)CD20與10例T細(xì)胞非霍奇淋巴瘤中的2例存在交叉反應(yīng)，我們未發(fā)現(xiàn)這一現(xiàn)象。Dobson等〔5〕也發(fā)現(xiàn)作為T細(xì)胞標(biāo)志的CD43與B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤有42.4%(14/33)的免疫染色交叉反應(yīng)，我們的結(jié)果與此相似。我們發(fā)現(xiàn)CD74對(duì)T細(xì)胞的染色交叉率達(dá)16.7%～35.7%，CD45RO和CD43對(duì)B細(xì)胞的交叉染色率達(dá)40%～47.1%，而CD3僅5.9%(1/17)。這就表明在進(jìn)行淋巴瘤細(xì)胞免疫表型劃分時(shí)需要使用一組標(biāo)志物進(jìn)行染色，即當(dāng)疑為B細(xì)胞淋巴瘤時(shí)應(yīng)采用B細(xì)胞表型抗體CD20、CD74加上T細(xì)胞表型抗體CD3和(或)CD45RO或CD43等；而疑為T細(xì)胞淋巴瘤時(shí)，應(yīng)用T細(xì)胞表型抗體CD45RO、CD3、CD43加上B細(xì)胞表型抗體CD20和(或)CD74等抗體。
對(duì)于T細(xì)胞的表型染色，CD3多克隆抗體近來(lái)已被認(rèn)識(shí)為具有高度敏感性和特異性，是一種可靠的T細(xì)胞表型染色的核心成員。CD3復(fù)合物由多種亞單位組成〔6〕，當(dāng)與抗原接觸時(shí)作為T細(xì)胞受體(TCR)復(fù)合物的信號(hào)傳導(dǎo)單位，我們所經(jīng)常使用的抗-CD3多克隆抗體是直接作用于CD3復(fù)合物的ε亞單位上。ε亞單位是一種非糖基肽，既往認(rèn)為抗體為多克隆性抗體存在某些缺點(diǎn)，例如存在批間差異(此通過(guò)操作者的質(zhì)控而減到zui小)，有相對(duì)較深的背景染色(應(yīng)用微波抗原修復(fù)可減輕此抗體的背景染色)以及操作上的不方便。即需要使用不同的二抗(此已為廣譜二抗的應(yīng)用而消除)。
對(duì)于T細(xì)胞淋巴瘤的診斷，通常有多種抗體可供使用，如CD45RO、CD3和CD43等。但為大家所廣泛使用的抗體CD45RO和CD43對(duì)B細(xì)胞、粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞和組織細(xì)胞具有明顯的染色交叉性，因此不具有細(xì)胞譜系的特異性。Chetty和Gatter〔7〕綜述了10位作者的研究，與其他的T細(xì)胞標(biāo)志抗體相比較，CD3(多克隆)免疫組化染色率在51%～100%之間；我們結(jié)果與他們相似，同時(shí)對(duì)B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤的染色交叉率僅為5.9%，因此，CD3具有T細(xì)胞譜系免疫染色的特異性。他們建議使用一組標(biāo)志抗體包括CD3和CD45RO(UCHL1)，作為非霍奇金淋巴瘤常規(guī)的免疫組化染色抗體。
總之，在進(jìn)行非霍奇金淋巴瘤免疫表型劃分時(shí)，建議使用一組抗體，包括CD20、CD74、CD3、CD43、CD45RO等；同時(shí)本實(shí)驗(yàn)表明CD3是一種具有高度敏感性和高度特異性的T細(xì)胞標(biāo)志抗體，值得推薦使用。