柱式昆蟲RNAout
產(chǎn)品及特點 本產(chǎn)品是專門用于從富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的動物樣品（尤其是昆蟲樣品）中提取總RNA的試劑。該產(chǎn)品特點如下：
1. 操作簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘。
2. RNA純度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。
3. 適用于各種昆蟲組織，每100mg組織能提取到20-30ug 總RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實驗。
5. 一站式，提供RNase-free的樣品收集管。
規(guī)格及成分 成 份 50次包裝
溶液A 50 mL
溶液B 15 mL
溶液C 50 mL
離心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
RNA洗脫液 10 mL
使用手冊 1份

運輸及保存 常溫運輸，4℃保存（RNA洗脫液4℃保存），有效期一年。
自備試劑 氯仿。
使用方法 1. 將50-300mg昆蟲組織放入10-15 mL塑料離心管中，加入1 mL溶液A，然后用勻漿器勻漿5-20秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎昆蟲組織，硯磨完后加入1 mL溶液A。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65℃水浴使沉淀*溶解并充分搖勻后再取用。
2. 將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5 mL塑料離心管中（可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片）。
3. 在離心管中加入0.3 mL的溶液B和0.2 mL自備氯仿，在振蕩器上振蕩30秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
4. 室溫12,000 rmp離心3-5分鐘，兩相間將有約5-10毫米厚的細(xì)胞破碎物。
5. 將上清液（約0.6 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5 mL塑料離心管中，下層有機相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。留下100 uL上清液不取。
6. 加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。
7. 將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，12,000 rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。
8. 將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中， 12,000 rmp室溫離心半分鐘，棄穿透液。
9. 加0.7 mL通用洗柱液，室溫12,000 rmp離心半分鐘，棄穿透液。
10. 加0.3 mL通用洗柱液，室溫12,000 rmp離心半分鐘，棄穿透液。此步可以省略。
11. 室溫12,000 rmp離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響RNA的使用。
12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中，加入50-100 uL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。
13. 12,000 rmp室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的電泳檢測：如果需要做Northern雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行RNA電泳，因為非變性膠不能分離所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。注意：大部分昆蟲的28S RNA被切割成兩個小的片段，彼此用氫鍵相連，所以在甲醛變性膠中，沒有28S帶出現(xiàn)（文獻見：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7）
15. RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將5-10 μL RNA溶于TE緩沖液中（pH7.5-8.2之間）檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），進而計算出RNA的產(chǎn)量（濃度X體積）和產(chǎn)率（RNA產(chǎn)量/組織用量）。
16. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之間（具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān)），高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響RT-PCR等反應(yīng)。