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小鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA 試劑盒

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所在地北京市

更新時間:2017-02-18 08:58:37瀏覽次數(shù):434次

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小鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA 試劑盒
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小鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA 試劑盒
樣品形式:血清/血漿/細胞培養(yǎng)上清/其它生物液體/組織等(具體情況請咨詢)
保存與運輸:2到8℃
應用范圍:科研用檢測試劑
小鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA 試劑盒實驗材料與試劑配制:
1. 儀器與材料:酶標儀(使用前預熱30分鐘,微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。
2. 洗液的配制:按 1:100的比例配制洗液備用。 樣品收集、處理及保存
1. 細胞培養(yǎng)上清:適用于檢測體外培養(yǎng)的細胞分泌性成份。用無菌管收集上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2. 細胞:用PBS反復洗滌細胞 3次,調(diào)整細胞濃度達到10^4-10^6/ml左右,通過反復凍融,使細胞破壞,并放出細胞內(nèi)成份。或者細胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
3. 血清: 在室溫 下, 血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
4. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置 10 -20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集 ,以 1000×g離心、15 分鐘 ,收集上清。
6. 組織標本:切取 組織標本,稱取重量0.5mg加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,超聲破碎儀,將標本勻漿,以2000 -300rmp離心 20 分鐘,收集上清進行檢測 。
7. 樣品 中不能含有 NaN3,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的( HRP)活性。
8. 保存 :如果樣品不能立即檢測,應將其分裝,-80 ℃保存,避免反復冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。血液標本盡可能的不要使用溶血或高脂。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在 37 ℃或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解 或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解并確保樣品均勻地充分解凍。
小鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA 試劑盒操作步驟 :
1. 取出 試劑盒,室溫( 20 -25 ℃)放置 30 分鐘。
2. 分組: 取出 96 孔板 根據(jù)待測樣品數(shù) 量加上標準品的數(shù)量決定所需板條,把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,分別設標準品組(6個濃度)、空白 孔、待測樣品組。
注:為減少實驗誤差,保證準確性,建議設置復孔。
3. 加樣:依照標準品的順序分別加入100ul 的標準品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入100ul的蒸餾水;其余微孔中加入100ul的待測樣本。
4. 加酶標溶液:標準品組、待測樣本組各孔中加入50ul 的酶標溶液 (空白對照孔除外)。
5. 溫育:酶標板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37 ℃恒溫孵育恒溫孵育 1小時。
6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置15 -30s 30s,充分清洗酶標板5次,用吸水紙*拍干。
7. 顯色:各孔加入顯色劑A液 50ul 后,再加入顯色劑 B液 50ul 。
8. 終止: 25 -37 ℃下避光反應10 -15分鐘, 加入 50 ul 終止液。
9. 讀板:在 450nm波長讀取各孔的O 值。注: 讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,
讀板時間控制在終止反應后的30 分鐘內(nèi),以免影響準確性。
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