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上海哈靈生物科技有限公司
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檢測(cè)銅綠假單胞菌對(duì)化妝品的影響的六大步驟
2013-9-26 閱讀(871)
銅綠假單胞菌在化妝品中指綠膿桿菌，綠膿桿菌對(duì)人有致病力，可以致傷處化膿，導(dǎo)致敗血癥等。
銅綠假單胞菌檢測(cè)方法如下：
1.增菌培養(yǎng)：取10mL1:10樣品稀釋液加到90mLSCDLP液體培養(yǎng)基中，放置于37℃培養(yǎng)18h～24h。如果有綠膿桿菌生長(zhǎng)，培養(yǎng)液表面會(huì)出現(xiàn)一層薄菌膜，培養(yǎng)液通常會(huì)呈現(xiàn)黃綠色或藍(lán)綠色。
2.分離培養(yǎng)：從培養(yǎng)液的薄膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種在十六烷基*基溴化銨瓊脂平板上，放置于37℃培養(yǎng)18h～24h。若綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上，其菌落扁平無(wú)定型，向周邊擴(kuò)散或略有蔓延，表面濕潤(rùn)，菌落變成灰白色，菌落周圍培養(yǎng)基擴(kuò)散有水溶性色素，這種培養(yǎng)基選擇性較強(qiáng)，在此培養(yǎng)基中大腸艾希氏菌不能生長(zhǎng)，革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)較差。
如果沒(méi)有十六烷基*基溴化銨培養(yǎng)基的話，也可以選擇使用乙酰胺培養(yǎng)基進(jìn)行分離，將菌液劃線接種到平板上，置于37℃培養(yǎng)24h，綠膿桿菌在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，菌落扁平，邊緣不整齊，菌落周圍培養(yǎng)基帶有些許粉紅色，其它菌沒(méi)有生長(zhǎng)。
3.染色鏡檢：選擇可疑的菌落，涂片，用革蘭氏染色，鏡檢結(jié)果為革蘭氏陰性的應(yīng)該進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)。
4.氧化酶試驗(yàn)：取一小塊干凈的白色濾紙片放于滅菌平皿中，用無(wú)菌玻璃棒取綠膿桿菌可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基對(duì)苯二胺試劑，如果在15s～30s之內(nèi)，菌落出現(xiàn)粉紅色或紫紅色，則為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性；如果培養(yǎng)物不變色，則為氧化酶試驗(yàn)陰性。
5.綠膿菌素試驗(yàn)：選取可疑菌落2～3個(gè)，分別接種在綠膿菌素測(cè)定培養(yǎng)基上，放在37℃培養(yǎng)24h，加入氯仿3mL至5mL，充分振蕩使培養(yǎng)物中的綠膿菌素溶解于氯仿液內(nèi)，待氯仿提取液呈藍(lán)色時(shí)，用吸管將氯仿移到另一試管中并加入1mol/L的鹽酸1mL左右，振蕩后，靜置片刻。如上層鹽酸液內(nèi)出現(xiàn)粉紅色到紫紅色時(shí)為陽(yáng)性，表示被檢物中有綠膿菌素存在。
6.硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗(yàn)：挑取可疑的綠膿桿菌純培養(yǎng)物，接種在硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。凡在硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)的小倒管中有氣體者，即為陽(yáng)性，表明該菌能還原硝酸鹽，并將亞硝酸鹽分解產(chǎn)生氮?dú)狻?br />
7.明膠液化試驗(yàn)，取綠膿桿菌可疑菌落的純培養(yǎng)物，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi)，置37℃培養(yǎng)24h，取出放冰箱10min～30min，如仍呈溶解狀時(shí)即為明膠液化試驗(yàn)陽(yáng)性；如凝固不溶者為陰性。
8.42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)：挑取可疑的綠膿桿菌純培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，放在41～42℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24h～48h，綠膿桿菌能生長(zhǎng)，為陽(yáng)性，而近似的熒光假單胞菌則不能生長(zhǎng)。
銅綠假單胞菌檢驗(yàn)結(jié)果分析：
被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，在分離平板上有典型或可疑菌落生長(zhǎng)，經(jīng)證實(shí)為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗(yàn)皆為陽(yáng)性者，就可報(bào)告被檢樣品中檢測(cè)出綠膿桿菌；如果綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)三者皆為陽(yáng)性時(shí)，仍可報(bào)告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。
