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植物葉片葉綠體粗提分離試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
植物葉片葉綠體粗提分離試劑是一種旨在通過物理破壁和化學破膜及離心處理方法，從植物葉片組織中分
離出完整而純化的葉綠體細胞器的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。適合
于菠菜、豌豆、萵苣、卷心菜、甜菜、煙草等各種新鮮植物葉片（leaf）組織，同時也適用于植物谷粒（grain）、
種子（seed）等葉綠體成分的分離。用于高等植物不育性、葉綠體功能和活性、遺傳等研究。產(chǎn)品即到即
用，操作簡易，性能穩(wěn)定，無核酶和蛋白酶污染，萃取純度和產(chǎn)量皆高。
技術(shù)背景
葉綠體（chloroplast）是綠色植物進行光合作用和能量轉(zhuǎn)化的重要細胞器。葉綠體是細胞質(zhì)中的一種色素體，
因含葉綠素而成綠色。葉綠體由外被（envelope）、類囊體（thylakoid）和基質(zhì)（stroma）組成。葉綠體DNA
是一種閉合環(huán)狀雙股結(jié)構(gòu)，含有10至30個基因，編碼200個蛋白質(zhì)。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
凈化液（Reagent C） 毫升
強化液（Reagent D） 毫升
保存液（Reagent E） 毫升
產(chǎn)品說明書1 份
保存方式
保存凈化液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6 月
用戶自備
15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
50 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器
1.5 毫升離心管：用于保存葉綠體樣品
尼龍絲或60 微米尼龍網(wǎng)：用于去除植物裂解殘渣
小型漏斗：用于過濾的裝置
（微型）臺式離心機：用于樣品操作
DOUNCE 勻漿器：用于裂解組織細胞
渦旋震蕩儀：用于混勻
實驗步驟
一、物理勻漿法
實驗開始前，將試劑盒里的凈化液（Reagent C）凍融，然后移出xx 毫升凈化液（Reagent C）和xx 毫升
的裂解液（Reagent B）到15 毫升錐形離心管里，混勻后，標記為裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進
行下列操作。
1． 準備好新鮮的植物葉片組織，并秤重以確定1 克組織重量
2． （選擇步驟）放進預(yù)冷的50 毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入xx 毫升清理液（Reagent A）清洗1 次
4． 用刀片切碎組織（注意：建議去除葉莖）
5． 放進一個預(yù)冷的15 毫升錐形離心管
6． 加入預(yù)冷的xx 毫升裂解工作液
7． 渦旋震蕩5 秒，充分混勻
8． 即刻放進預(yù)冷的DOUNCE 勻漿器
9． 置于冰槽里用勻漿棒勻化組織（約80 下）（注意：參見注意事項9）
10．（選擇步驟）準備1 個小型漏斗，內(nèi)襯尼龍絲或60 微米尼龍網(wǎng)，置于50 毫升錐形離心管上
11．（選擇步驟）將所有組織勻漿液移入到小型漏斗里過濾（注意：可以使用4 層紗布替代）
12．放進4℃臺式離心機離心5 分鐘，速度為200g
13．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預(yù)冷的15 毫升錐形離心管（如果跳過過濾步
驟或上清液含有肉眼可見的殘渣，重復(fù)離心5 分鐘一次，速度為200g）——此步驟去除細胞壁殘渣、
細胞核和未溶解的細胞
14．放進4℃臺式離心機離心10 分鐘，速度為1000g
15．小心抽去上清液，保留綠色沉淀顆粒，避免光照——此步驟獲得葉綠體沉淀物
16．加入xx 微升保存液（Reagent E），充分混勻沉淀顆粒群
17．（選擇步驟）進行葉綠素定量測定（建議使用植物葉綠體總蛋白定量檢測試劑盒）
18．即刻移入1.5 毫升離心管，放進－70℃冰箱里保存
二、化學處理法
實驗開始前，將試劑盒里的凈化液（Reagent C）凍融，然后移出xx 毫升凈化液（Reagent C）和xx 毫升
的裂解液（Reagent B）到15 毫升錐形離心管里，混勻后，標記為裂解工作液，置入冰槽里備用。然后進
行下列操作。
1． 準備好新鮮的植物組織（葉片、谷粒、種子等），并秤重以確定1 克組織重量
2． （選擇步驟）放進預(yù)冷的50 毫升錐形離心管
3． （選擇步驟）加入xx 毫升清理液（Reagent A）清洗1 次
4． 移入一個液氮凍存管
5． 即刻放進液氮罐過夜
6． 次日從液氮罐里取出，即刻（zui快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）
7． 放進一個15 毫升錐形離心管
8． 加入預(yù)冷的xx 毫升裂解工作液
9． 渦旋震蕩5 秒，充分混勻
10．在冰槽里孵育2 分鐘，期間渦旋震蕩5 秒一次
3
11．加入預(yù)冷的xx 微升強化液（Reagent D）
12．渦旋震蕩5 秒，充分混勻
13．在冰槽里孵育5 分鐘，期間渦旋震蕩5 秒二次（注意：參見注意事項10）
14．加入預(yù)冷的xx 毫升保存液（Reagent E），輕輕搖動試管混勻
15．（選擇步驟）準備1 個小型漏斗，內(nèi)襯尼龍絲或60 微米尼龍網(wǎng)，置于50 毫升錐形離心管上
16．（選擇步驟）將所有組織裂解液移入到小型漏斗里過濾（注意：可以使用4 層紗布替代）
17．放進4℃臺式離心機離心5 分鐘，速度為200g
18．小心移出上清液（注意：不要觸碰沉淀物）到另一個新的預(yù)冷的15 毫升錐形離心管（如果如果跳過過
濾步驟或上清液含有肉眼可見的殘渣，重復(fù)離心5 分鐘一次，速度為200g）——此步驟去除細胞壁殘
渣、細胞核和未溶解的細胞
19．放進4℃臺式離心機離心10 分鐘，速度為1000g
20．小心抽去上清液，保留綠色沉淀顆粒，避免光照——此步驟獲得葉綠體沉淀物
21．加入xx 微升保存液（Reagent E），充分混勻沉淀顆粒群
22．（選擇步驟）進行葉綠素定量測定（建議使用植物葉綠體總蛋白定量檢測試劑盒）
23．即刻移入1.5 毫升離心管，放進－70℃冰箱里保存
注意事項
1． 本產(chǎn)品為20 次操作（1 克植物葉片組織）
2． 建議使用新鮮植物樣品，暗室4℃冰箱里過夜
3． 植物樣品務(wù)必避光，以防止淀粉聚集
4． 葉綠體操作均須在4℃或以下狀態(tài)下進行
5． 操作時，須無菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent E）
6． 建議使用足夠的組織量
7． 建議植物組織使用物理法組織勻漿器操作為；德國的BRAUN 細胞勻漿器zui為理想
8． 建議嚴格控制操作時間
9． 通常勻化次數(shù)為80 下（或組織塊狀消失為止）達到80％的組織細胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織
類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3 微升勻漿物的組織細胞裂解程度：完整組織細胞呈現(xiàn)發(fā)
亮的圓環(huán)。低于50％可以增加勻化次數(shù)
10．通常孵育5 分鐘達到80％的組織細胞裂解為理想狀態(tài)，但不同的組織類型會存在差異。用戶可以通過
顯微鏡觀察3 微升裂解物的組織細胞裂解程度：完整組織細胞呈現(xiàn)發(fā)亮的圓環(huán)。低于50％可以增加孵
育時間和渦旋震蕩次數(shù)
11．本公司提供系列植物葉綠體分析技術(shù)產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1、本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2、本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的葉綠體內(nèi)外膜完整
3、本產(chǎn)品經(jīng)鑒定分離的葉綠體維持正?；钚?/span>
4、本產(chǎn)品經(jīng)鑒定不含污染性蛋白酶和核酶