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上海哈靈生物科技有限公司
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大鼠前列腺素E2（PEG2）ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒說明書
2013-8-15 閱讀(787)
| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 89.7KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 下載次數(shù) | 166次 | |
| 資料類型 | PNG 圖片 | 瀏覽次數(shù) | 787次 |
大鼠前列腺素E2（PEG2）ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒
使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：48T/96T
15pg/ml-360pg/ml
使用目的：
大鼠前列腺素E2（PEG2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒用于測定大鼠組織樣本中大鼠前列腺素E2（PEG2）含量。
實驗原理
大鼠前列腺素E2（PEG2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠前列腺素E2（PEG2）水平。用純化的大鼠前列腺素E2（PEG2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入前列腺素E2（PEG2），再與HRP標記的前列腺素E2（PEG2）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列腺素E2（PEG2）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠前列腺素E2（PEG2）濃度。
試劑盒組成
120倍濃縮洗滌液20ml×1瓶7終止液3ml×1瓶
2酶標試劑3ml×1瓶8標準品（720pg/ml）0.5ml×1瓶
3酶標包被板12孔×4條9標準品稀釋液1.5ml×1瓶
4樣品稀釋液3ml×1瓶10說明書1份
5顯色劑A液3ml×1瓶11封板膜2張
6顯色劑B液3ml×1/瓶12密封袋1個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
3．組織處理：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
操作步驟
1.標準品的稀釋：大鼠前列腺素E2（PEG2）酶聯(lián)免疫分析試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
360pg/ml5號標準品150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
180pg/ml4號標準品150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
90pg/ml3號標準品150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
45pg/ml2號標準品150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
22.5pg/ml1號標準品150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個月。
