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抗血清鑒定參考意見
2013-12-25 閱讀(921)
抗血清鑒定參考意見當免疫組化染色沒有預期的結(jié)果時,應系統(tǒng)地找到原因,而每一次只能排除一個可能的原因。
① 確認是否忽視一些試劑添加,包括一抗、二抗、三抗及底物等。
② 確認所有的試劑是否按正確的順序加入,是否有足夠的時間。
③ 對照抗體的標簽確認是否使用正確的抗體,以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配,這一點是非常重要的。比如,如果反是抗體兔起源,二抗一定要用抗兔的二抗來匹配;或一抗是小鼠的IgM一抗,二抗必須是兔抗小鼠的IgM二抗。
④ 抗血清鑒定參考意見檢查抗體所使用的稀釋和稀釋液。
⑤ 檢查抗體的有效期和儲存條件,尤其是標記了酶或熒光素的抗體,現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存,應避免反復凍融,試劑保存時一定要避免與揮發(fā)性有機溶劑同放一室,以免降低抗體的效價。
⑥ 檢查標本的儲存條件,的已知陽性的標本來同時做陽性對照。
⑦ 檢查色原/底物溶液,zui簡單的檢測方法是將一滴標記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中,如果底物發(fā)生預期的顏色變化,因素可排除基質(zhì)。需要注意的是,有些底物在制成工作液后應在一段時間后用完,否則會失敗。
⑧ 檢查沖洗液是否反應試劑的比賽,溶液的pH值很重要,與過氧化物酶底物溶液,比賽中不應含有疊氮鈉。
⑨ 抗血清鑒定參考意見檢查復染劑和封片劑是否和色彩搭配使用。