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elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)優(yōu)勢    

    elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)優(yōu)勢可以追溯到1963年，溶血空斑技術(shù)，到1983年后的20年，該方法只表現(xiàn)出高靈敏度，操作簡便。才開始大顯身手的檢測。所以，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法和其他現(xiàn)有技術(shù)中，這樣做的優(yōu)點(diǎn)？

    elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)約會從1963年起，誰創(chuàng)立杰尼溶血空斑技術(shù)（溶血性斑塊形成細(xì)胞檢測， HPF ） ，這種技術(shù)可以用來檢測和計數(shù)單抗體形成細(xì)胞。 Czerkinsky如分泌特異性抗體的細(xì)胞數(shù)在脾細(xì)胞中檢測到了該方法使用的成熟的單克隆抗體的技術(shù)，在1983年，發(fā)現(xiàn)高靈敏度的方法是簡單的。后來，他們通過這種方法定量分析有絲分裂原刺激的外周血細(xì)胞分泌IFN2γ的數(shù)量。隨后，在單細(xì)胞水平的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法檢測分泌其他細(xì)胞因子（如IL- 2 ， IL-4， IL - 5 ，IL-10 ，TNF-α和IL-6 ） ，通過設(shè)數(shù)量。諾思通等用生物素 - 抗生物素蛋白生物擴(kuò)增方法，提高了該方法的靈敏度，杜林計算機(jī)輔助圖像分析系統(tǒng)（電腦輔助視頻圖像分析， CVIA ）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法TNF2α自動分析的大小和數(shù)量，計算和負(fù)載抗原肽的目標(biāo)暴露后的外周血單個核細(xì)胞（PBMC） ，在抗原特異的CD8 + T細(xì)胞數(shù)的細(xì)胞，不僅提高了大規(guī)模的研究的背景染色的分辨率也使其成為可能。 Vaquerano這樣一個數(shù)碼相機(jī)和計算機(jī)相結(jié)合，開發(fā)了類似的點(diǎn)計數(shù)系統(tǒng)，每口井的斑點(diǎn)數(shù)量大于100時，這種方法是比較客觀的，可重復(fù)的，節(jié)省時間。

    隨著elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，其優(yōu)勢正在逐漸出現(xiàn)，下面將列出一些傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)等方面的優(yōu)勢相比， 。

    elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)分析，可以可視化的單細(xì)胞的分泌產(chǎn)物。在這些分析極為敏感的，因?yàn)樗侵苯釉诓蹲街車姆置诩?xì)胞，稀釋在表面，或靠近捕獲細(xì)胞上的受體，或降解前。zui小到1:100細(xì)胞體外頻率測量精度。這個分辨率已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子，采用四聚體染色和酶聯(lián)免疫吸附測量精度。這樣的高靈敏度是至關(guān)重要的，因?yàn)榭乖禺愋訲細(xì)胞在體外是典型的低頻率。高產(chǎn)量?細(xì)胞分析是可行的。一個相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室團(tuán)隊訓(xùn)練的數(shù)百個樣本，可測試在幾十抗原。只有少數(shù)的細(xì)胞，可用于通信和其它細(xì)胞學(xué)分析方法進(jìn)行了比較。例如， 45毫升的血液是足夠的測試600個不同的抗原/肽反應(yīng)。您可以定義CD4和CD8細(xì)胞的免疫因子的目標(biāo)。這是因?yàn)橹挥猩贁?shù)細(xì)胞可以在高產(chǎn)量模式下進(jìn)行分析。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法篩選肽庫，繪制免疫因子方面是一個理想的工具。用于確定親和性的抗原特異性T細(xì)胞的功能。這zui大可能是50％的肽類藥物的刺激。可以用來研究藥物處理的細(xì)胞，而不分泌過程。如果觀察到的凈產(chǎn)量減少，你可以判斷這種差異減少分泌細(xì)胞，每個細(xì)胞分泌或減少生產(chǎn)。淋巴細(xì)胞酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測后仍然活著。這使得分析后增值盡可能作進(jìn)一步的分析，克隆或低溫貯存，冷藏后可用于檢測人淋巴細(xì)胞，而不會失去其功能。前處理和后處理的樣品測試并排，可重復(fù)的結(jié)果。

（1 ）酶聯(lián)免疫吸附

    通過ELISA的顯色反應(yīng)，在酶標(biāo)儀測量吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較來自可溶性蛋白質(zhì)聚集體。elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)的顯色反應(yīng)，還可以通過細(xì)胞分泌的可溶性蛋白質(zhì)，在相應(yīng)的位置上的斑點(diǎn)出現(xiàn)清晰可辨的，可直接在顯微鏡下人工計數(shù)斑點(diǎn)或通過電腦輔助分析系統(tǒng)進(jìn)行計數(shù)的點(diǎn)，一個點(diǎn)代表一個細(xì)胞，蛋白質(zhì)分泌到細(xì)胞中計算出頻率。 （一些研究，不僅要測量的量的細(xì)胞因子的產(chǎn)生，需要檢測該細(xì)胞因子分泌細(xì)胞頻率），因?yàn)樗窃趩渭?xì)胞水平檢測， ELISPOT比ELISA更敏感，從20萬至30萬個細(xì)胞中檢測到一種分泌的的蛋白質(zhì)。捕獲抗體具有高親和力，高特異性，低內(nèi)毒素單克隆抗體，來刺激研究者激活的細(xì)胞，不會影響分泌細(xì)胞因子激活。

（2）和法國四聚體（四聚體的）

    近年來一直存在MHC2 Ⅰ類分子肽四聚體的法國。此方法的優(yōu)點(diǎn)在于快速，直接，敏感和特異的，即使在身體MCTL水平小于1％ ，與MHC2 Ⅰ抗原肽四聚體的方法仍然可以直接測量靈敏度的值是高于LDA的5?10倍。但是，應(yīng)用程序的技術(shù)，有更多的困難：除了合成的分子和穩(wěn)定的MHCⅠ類的技術(shù)困難，但主要缺點(diǎn)是，抗原表位的選擇。因?yàn)槊總€反應(yīng)只能分析一個單一的抗原決定簇，和MHCⅠ類分子結(jié)合的各種抗原決定簇，形成CTL應(yīng)答的能力，但與遺傳背景和時間的變化，所以選擇正確的抗原決定簇，就顯得尤為重要?？乖砦缓Y選可以通過elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)，但對整個肽庫掃描不是一件容易的事。當(dāng)然，利用生物信息學(xué)的抗原表位篩選有很大的幫助。同時，研究結(jié)果表明，并非所有的四聚體陽性細(xì)胞鑒定通過準(zhǔn)確的功能，四聚體陽性細(xì)胞能分泌酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法是數(shù)10倍INF2γ細(xì)胞，其中有許多不表現(xiàn)出一種惰性的功能細(xì)胞，可能代表了記憶性CTL前體細(xì)胞類型。四聚體分析只增加了敏感性分析，同時測定其功能是非常重要的。

（3）與CR51釋放試驗(yàn)

    這種方法是更經(jīng)典的方法中，雖然被CTL識別的抗原多樣性的檢測是非常有效的，并能準(zhǔn)確地示出由CTL表位的確認(rèn)，但至少半定量的水平，但自發(fā)CR51標(biāo)記的細(xì)胞釋放率更高，更長的時間是不適合耕種，記下所需的細(xì)胞濃度為高，從而帶來不便試用此外， CR51釋放方法，測得的特性的細(xì)胞群體，而不是一個單一的細(xì)胞。

（4）和細(xì)胞內(nèi)染色CK

    法相比較elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法，細(xì)胞內(nèi)染色細(xì)胞內(nèi)CK染色， CK （ ICS）的細(xì)胞內(nèi)積累的主要因子染色和流式細(xì)胞儀方法多色參數(shù)，檢測循環(huán)抗原特異性T淋巴細(xì)胞可行的淋巴細(xì)胞的方法，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法能夠檢測到所有分泌的CK ECTL 。

應(yīng)用

    目前，elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法已被用于檢測藥物，化學(xué)品和其他CK復(fù)雜的功能和功能等，因此，調(diào)節(jié)免疫功能的體內(nèi)效果提供了一個測試的基礎(chǔ)。近年來，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法技術(shù)在評價試驗(yàn)的癌癥疫苗，免疫監(jiān)視和免疫學(xué)研究被廣泛的應(yīng)用日益增多。

（1）診斷結(jié)核感染人類

    zui近的研究發(fā)現(xiàn)，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌和隱性感染者顯著。通過檢測IFN2γ能指望產(chǎn)生IFN2γ特異性T細(xì)胞，作為一種特定的結(jié)核分枝桿菌感染的診斷標(biāo)志物清點(diǎn)人數(shù)色斑。應(yīng)用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)試驗(yàn)具有較高的特異性，敏感性為96 ％，而結(jié)核菌素試驗(yàn)敏感性為69％ 。酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法結(jié)核桿菌感染更快速，準(zhǔn)確地診斷，卡介苗（ BCG ）接種疫苗引起的結(jié)核菌素試驗(yàn)陽性相鑒別。

（2）酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)技術(shù)在抗癌疫苗研究中的應(yīng)用

    elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法技術(shù)來監(jiān)測療效的疫苗已用于分析和評估病人從感染的PBMC （外周血單核細(xì)胞）中檢測到在癌癥患者中的腫瘤特異性T細(xì)胞疫苗試驗(yàn)誘導(dǎo)肽特異性T淋巴細(xì)胞。能實(shí)現(xiàn)自動化識別的腫瘤抗原表位的酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法板預(yù)先準(zhǔn)備的，移液洗板，讀，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)定量分析可能是腫瘤或病毒特異性T細(xì)胞應(yīng)答給出。

（3）抗感染免疫中的應(yīng)用

    CTL （細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞）在抗病毒的免疫反應(yīng)中起著重要的地位， CD4 +輔助性T細(xì)胞亞群的Th1 / Th2的平衡，抗感染中起著同樣重要的作用。此外，使用ELISPOT測定法可以檢測CK IFN2γ H IV -特異性CTL反應(yīng)，免疫相關(guān)的信息的?elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法也可以用來評估的H IV21粘膜的CD4 + T細(xì)胞的免疫應(yīng)答引起的感染的方法，進(jìn)一步了解，作為以及? IVgp 120克二氧化碳表達(dá)霍亂毒素DNA疫苗的免疫原性。在許多抗菌免疫的研究，該方法還起著重要的作用。

（5）應(yīng)用器官移植

    受體對供體特異性HLA抗體的存在不僅介導(dǎo)的超急性排斥反應(yīng)，但也導(dǎo)致急性排斥反應(yīng)，敏感的患者需要器官捐贈的限制同種抗原，從而提高移植的等待時間。一個單一的抗體分泌細(xì)胞elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)是一個強(qiáng)大和有效的檢測，具有靈敏度高。因此，刺激記憶B細(xì)胞的增殖，分化為漿細(xì)胞，建立了一種用于檢測特定的HLA- ELISPOT法是抗體產(chǎn)生細(xì)胞的*手段。

（6）其他

    此外，elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)檢測方法移植研究，疫苗開發(fā)，TH0 /的Th1 / Th2細(xì)胞轉(zhuǎn)化分析，自身免疫性研究，癌癥研究，過敏機(jī)制探索IL24 （白細(xì)胞介素- 24 ）誘導(dǎo)的免疫球蛋白亞型轉(zhuǎn)換，傳染病研究，抗原表位的本地化地圖免疫和體液免疫的研究和其他方面的重要應(yīng)用。

    elisa酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)在體內(nèi)的影響提供了一個測試基準(zhǔn)調(diào)節(jié)免疫功能，從而在癌癥研究，免疫學(xué)被廣泛使用。因?yàn)?，用ELISA法相比，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法更靈敏的，而用有限稀釋法LDA ，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法更容易操作，CK和胞內(nèi)染色法，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)法更廣泛。