 |
上海哈靈生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： ELISA代測(cè)服務(wù),ELISA試劑盒價(jià)格,ELISA試劑盒,ELISA試劑盒說明書,大鼠ELISA試劑盒 |
會(huì)員.png)
聯(lián)系電話
18918128223
公司信息
- 聯(lián)系人：
- 何經(jīng)理
- 電話：
- 手機(jī)：
- 18918128223
- 傳真：
- 86-021-51010234
- 地址：
- 國定東路200號(hào)
- 郵編：
- 200433
- 網(wǎng)址：
- www.halingbio.com/
ELISA實(shí)驗(yàn)方法
2013-7-29 閱讀(872)
ELISA實(shí)驗(yàn)方法
方法一：雙抗體夾心法
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次持續(xù)3分鐘。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔）。
3. 加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6. 結(jié)果判定：可以在白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，用“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，在450nm（如果以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，如果大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽性。
方法二：間接法
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；
4.（同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6.zui后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
：
或
