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上海泛柯實(shí)業(yè)有限公司

熒光定量PCR檢測HBV-DNA ELISA方法測定

時間:2013-12-12閱讀:394
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熒光定量PCR檢測HBV-DNA ELISA方法測定

 熒光定量PCR技術(shù)具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn),能更準(zhǔn)確反映出HBV感染者血清中病毒含量,ELISA法檢測人體對乙型肝炎(乙肝)病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)。將兩者結(jié)合,分析HBV感染者整個病程中血清抗原、抗體的轉(zhuǎn)化過程及與HBV DNA的相關(guān)性。 1 資料與方法 1.1  一般資料:選取20111月~201112月我院住院、門診乙型肝炎患者、體檢者共3 120例及健康對照20例。

1.  HBV DNA熒光定量檢測:儀器采用ROTOR GENE 3000實(shí)時熒光定量PCR儀。HBV DNA試劑盒購自購自中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司。定量結(jié)果采用求算對數(shù)平均值的方法來計算HBV DNA平均拷貝數(shù)。 1.3  HBV免疫學(xué)標(biāo)志物檢測:采用ELISA方法檢測HBV標(biāo)志物,ELISA試劑盒購自廈門英科新創(chuàng)科技有限公司。 ELISA試劑盒

2 結(jié)果  根據(jù)乙肝五項(xiàng)指標(biāo)的不同,我們對3 120例血清標(biāo)本的分析結(jié)果做分組,并統(tǒng)計HBV DNA結(jié)果。HBV DNA檢測結(jié)果與免疫學(xué)指標(biāo)結(jié)果的比較 乙肝五項(xiàng)指標(biāo) 例數(shù) HBV DNA陽性數(shù)[例(%] HBV DNA含量(IU/ml 1.HBsAg、HBeAg、抗HBc陽性組 1 148 1 11196.8)① 7.94±0.34 2.HbsAg、抗Hbe、抗HBc陽性組 1 357 69951.5)② 4.57±2.07 3.HBsAg、抗HBc陽性組 551 26748.5)③ 4.33±1.12 4.HBs陽性組 64 23.1 3.96 5.陰性正常人血清 20 15.0 3.11 注:②、③與①比較,P0.01 3 討論  我們對3 120例乙肝患者及體檢者、20例乙肝五項(xiàng)指標(biāo)陰性的健康對照同時進(jìn)行免疫學(xué)指標(biāo)和HBV DNA熒光定量PCR檢測。ELISA試劑盒

說明HBeAg+)乙肝患者HBV處于大量復(fù)制階段,患者具有高度傳染性,與文獻(xiàn)報道一致[1]。2 HBV DNA檢出率為51.5%,3HBV DNA檢出率為48.5%,HBV DNA拷貝數(shù)差異很大,說明免疫學(xué)指標(biāo)結(jié)果相同的患者,其體內(nèi)HBV DNA濃度存在很大差異。2HBV DNA檢出率達(dá)51.5%HBV DNA含量較1組低,因此,系統(tǒng)轉(zhuǎn)換并不能說明HBV停止復(fù)制,可能與病毒變異等因素有關(guān).說明患者體內(nèi)是否有病毒復(fù)制及其拷貝數(shù)單靠ELISA方法檢測HBV標(biāo)志物是無法準(zhǔn)確判斷的,而必須進(jìn)行HBV DNA的定量檢測???/span>HBs是保護(hù)性抗體,但本實(shí)驗(yàn)中64例抗HBs陽性者中仍有2例檢出HBV DNA,這與文獻(xiàn)報道的結(jié)果相符,說明抗HBs陽性者并非*沒有傳染性,因此對抗HBs陽性者判斷其是否具有傳染性仍需通過檢測HBV DNA來加以分析。ELISA試劑盒  

值得注意的是HBVM全陰的20例標(biāo)本中,有1PCR陽性.這種陽性的存在,可能是病毒感染早期,抗原﹑抗體尚未形成;患者免疫功能低下,不產(chǎn)生免疫應(yīng)答或患者出現(xiàn)免疫耐受現(xiàn)象,ELISA無法測出相應(yīng)的抗原﹑抗體.或者是HBV s區(qū)基因變異致HbsAg抗原性變異,不能被ELISA方法檢出;或者前C區(qū)變異致不能產(chǎn)生HBeAELISA試劑盒

上海隆壘生物科技有限公司主要代理多種品牌進(jìn)口原裝、elisa試劑盒,細(xì)胞等到等。本公司作為酶聯(lián)免疫供應(yīng)商,憑借的技術(shù),的售前,售中,售后免費(fèi)代測服務(wù),共同鑄就高品質(zhì)的產(chǎn)品。多年專業(yè)酶免服務(wù),質(zhì)量保證,可免費(fèi)提供代測服務(wù),一周內(nèi)出結(jié)果。咨詢

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