傳統(tǒng)的寬場(chǎng)熒光顯微鏡通過(guò)物鏡將激發(fā)光聚焦,同時(shí)收集樣品的熒光信號(hào)成像。觀察其照明方式不難發(fā)現(xiàn),雖然焦平面上的光,但其上下的樣品也會(huì)被照亮,導(dǎo)致以下局限性:
(1)光毒性影響樣品生物活性,甚至造成細(xì)胞死亡;
(2)圖像分辨率和信噪比低。
光片顯微鏡與傳統(tǒng)顯微鏡的不同在于激發(fā)光的照明方式。其照明光是一張與成像面平行的薄薄的“光片” ,只有焦平面的樣品被照亮,而其上下的樣品不受影響。光片照明優(yōu)點(diǎn):
(1)提高圖像信噪比和軸向分辨率;
(2)減少了光漂白和光毒性:與傳統(tǒng)的熒光照明技術(shù)相比,光毒性可以被降低20-100倍,在更接近生理狀態(tài)的條件下,使用高量子效率的CCD或sCMOS探測(cè)器對(duì)活體樣品進(jìn)行大視野,高速,高分辨率長(zhǎng)時(shí)間三維成像;
特點(diǎn):(1)遠(yuǎn)低于寬場(chǎng)和共聚焦顯微鏡的光漂白和光毒性;
(2)XYZ軸近各向同性的光學(xué)分辨率,并優(yōu)于共聚焦的軸向分辨率;
(3)快速三維成像模式;
(4)可見光波段成像深度~200μm、橫向空間分辨率分辨率~400nm;紅外二區(qū)波段~2mm深度高分辨成像,橫向空間分辨率達(dá)到2μm;
(5)系統(tǒng)配備多波長(zhǎng)高功率激光光源,標(biāo)配405/488/561/638nm和660/785/850/980 nm激發(fā)光源,可選配加裝其他波長(zhǎng)光源。
(6)雙輸出通道,可同時(shí)成像;二向色鏡分束400-900nm & 950-1700nm 輸出通道;
(7)系統(tǒng)配合自主研發(fā)的成像軟件,可編程控制光激發(fā)、熒光發(fā)射、圖像采集和數(shù)據(jù)分析等功能。
(8)帶焦面校正,采集過(guò)程中不失焦;
(9)樣品尺寸:可支持標(biāo)準(zhǔn)載玻片、培養(yǎng)皿尺寸樣品,也可用于小鼠等活體樣本;