022174 抗生素檢定培養(yǎng)基2號(hào)(高pH)
Antibiotic Agar No.2(high pH)
用 途：
抗生素檢定培養(yǎng)基2號(hào)(高pH)用于、、、羅等效價(jià)及殘留的微生物學(xué)檢定(中華人民共和國(guó)藥典2010版)。
原 理：
本法是利用抗生素在瓊脂培養(yǎng)基內(nèi)的擴(kuò)散作用，抑菌圈直徑與抗生素的濃度或活性有關(guān);比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品兩者對(duì)接種的試驗(yàn)菌產(chǎn)生抑菌圈的大小，以測(cè)定供試品效價(jià)的一種微生物學(xué)方法。
配方(每升)：
胨 6g
葡萄糖 1g
牛肉膏粉 1.5g
酵母膏粉 6g
瓊脂 15g
最終pH 7.9±0.1
使用方法(管碟法)：
1、稱取抗生素檢定培養(yǎng)基2號(hào)(高pH)29.5g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝三角瓶，115℃高壓滅菌30min。
2、雙碟的制備應(yīng)在無(wú)菌室或潔凈室內(nèi)進(jìn)行，并注意避免微生物及抗生素污染。培養(yǎng)基應(yīng)在水浴中或微波爐內(nèi)融化，避免直火加熱。
3、雙碟的底層：用滅菌大口20mL吸管或其它滅菌分裝器，吸取已融化的培養(yǎng)基20mL注入雙碟內(nèi)，待凝固后加入菌層。(雙碟內(nèi)的培養(yǎng)基應(yīng)均勻的分布于平皿內(nèi)。)
4、菌層：取出試驗(yàn)用菌懸液，按預(yù)試好的加菌量[能得清晰的抑菌圈為度。二劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在18~22mm，三劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的中心濃度所致的抑菌圈直徑在15~18mm]，用滅菌吸管吸取菌懸液適量，加入已融化并保溫在水浴中(水浴溫度：細(xì)菌為48~50℃，芽孢可至60℃)的培養(yǎng)基內(nèi)，搖勻，作為菌層培養(yǎng)基使用。取出加有底層培養(yǎng)基的雙碟，用滅菌大口5mL、10mL吸管或其他適宜分裝器，吸取菌層培養(yǎng)基5mL，加于底層培養(yǎng)基上，使其均勻攤布，等凝固后放置鋼管。
5、放置鋼管：使用鋼管放置器或小子，使鋼管平穩(wěn)的落在培養(yǎng)基上，相應(yīng)劑量的鋼管 對(duì)角均勻放置。鋼管放妥后，雙碟靜置5~10分鐘后，再開(kāi)始滴加抗生素溶液。
6、滴加抗生素溶液用滅菌毛細(xì)滴管或微量加樣器(調(diào)節(jié)加樣量約為200-300μL)，在滴加之前用溶液洗2~3次。滴加標(biāo)準(zhǔn)品及供試品溶液順序，因?qū)嶒?yàn)設(shè)計(jì)方法不同而異。(2.2)法，在雙碟的4個(gè)鋼管中分別成“Z”字形滴加標(biāo)準(zhǔn)品及供試品高、低兩種濃度的溶液;在(3.3)法的6個(gè)鋼管中間隔3個(gè)鋼管中分別滴加標(biāo)準(zhǔn)品及供試品高、中、低3種濃度，并使相同濃度成對(duì)角。滴加溶液至鋼管口平滿。注意滴加時(shí)間溶液的間隔不可過(guò)長(zhǎng)。
7、滴加完畢，用陶瓦蓋覆蓋雙碟，平穩(wěn)置于雙碟托盤(pán)內(nèi)，雙碟疊放不可超過(guò)3層，將雙碟托盤(pán)水平平穩(wěn)地移入培養(yǎng)箱中間位置，在35~37℃或該藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的溫度下培養(yǎng)至所需時(shí)間。
8、抑菌圈測(cè)量：測(cè)量前應(yīng)檢查抑菌圈是否圓整，如有破圈或圈不圓整，應(yīng)舍棄該碟?？捎靡志y(cè)量?jī)x或游標(biāo)卡尺測(cè)量。
質(zhì)量控制：
本品在滅菌后應(yīng)澄清無(wú)沉淀，下列菌株接種后35~37℃培養(yǎng)16~18h生長(zhǎng)情況如下表：
貯 存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。
規(guī) 格：250g
參考文獻(xiàn)：
1. 《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版，附錄XI A 抗生素微生物鑒定法。
