肉毒梭菌A/B型毒素基因PCR檢測試劑盒
【產(chǎn)品簡介】
本試劑盒基于PCR技術(shù)，并適用于食品中肉毒梭菌A/B型毒素基因的檢測。
【檢測原理】
利用2對特異性引物和PCR反應(yīng)所需其他試劑，如反應(yīng)緩沖液、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等，加入待檢DNA模板樣品，即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。經(jīng)比對擴(kuò)增產(chǎn)物目標(biāo)條帶即可判定A/B型肉毒梭菌毒素基因。
【產(chǎn)品特點(diǎn)】
1. 快速簡便：將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理，增加試劑穩(wěn)定性，使用時(shí)減少溶液配制步驟，更為便捷，整個(gè)檢測反應(yīng)可在3 h內(nèi)完成；
2. 特異性高：按照GB 4789.12?2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗(yàn)》提供的目標(biāo)基因引物，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性；
3. 判讀簡單：擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外儀觀察目標(biāo)條帶即可判別，直觀方便。
【產(chǎn)品組分】
編號 | 組分名稱 | 規(guī)格×數(shù)量 |
-- | 凍干試劑(bont A/B) | 8管×3排 |
-- | 復(fù)溶液 | 1 mL×1管 |
Y06 | 陽性對照 | 1管（凍干型） |
-- | 陰性對照 | 1管（凍干型） |
-- | 裂解液 | 1 mL×1管 |
-- | 超純水 | 1 mL×1管 |
-- | 6×Loading buffer | 240μL×1管 |
| 說明書 | 1份 |
【所需其他材料和適用儀器】
1. PCR儀器、高速離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、紫外儀、移液器、移液槍頭及離心管等；
2. 瓊脂糖、溴化乙錠（EB）或其他核酸染料。
【使用指南】
1. 樣品前處理
1) 參照GB 4789.12?2016，挑取可疑菌落或待鑒定菌株接種TPGY，35℃±1℃厭氧培養(yǎng)24h。吸取TPGY培養(yǎng)液1mL至無菌離心管中，12000 r/min離心2 min，棄上清，加入30 μL裂解液，充分懸浮，轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min；
2) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。
2. 加樣、反應(yīng)
1) 使用時(shí)，分別加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照管中，充分溶解，-20℃存儲待用；
2) 取出干粉試劑，按照需求分別剪取n個(gè)檢測試劑管（n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照），每管加入18 μL復(fù)溶液，充分溶解后待用；
3) 向上述已加入復(fù)溶液的n個(gè)反應(yīng)管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2 μL，緊蓋后置于PCR儀中按設(shè)定的反應(yīng)程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；
4) PCR反應(yīng)程序如下：
3. 結(jié)果判讀
反應(yīng)后每管中加入4 μL6×Loading buffer，混勻，并取8 μL經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外儀下觀察，陰性對照無條帶擴(kuò)增，陽性對照中出現(xiàn)目標(biāo)條帶（參照圖1），PCR試驗(yàn)結(jié)果成立。根據(jù)每個(gè)樣品對應(yīng)的反應(yīng)產(chǎn)生的目標(biāo)條帶，即可判斷肉毒梭菌毒素基因類型。若陰陽性對照管反應(yīng)結(jié)果不符，則本次檢測結(jié)果無效，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
