活性氧（ROS）是氧正常代謝的天然副產(chǎn)物，在細胞信號傳導(dǎo)中起重要作用。但是，在與氧化應(yīng)激相關(guān)的狀態(tài)下，ROS水平會急劇增加。 ROS的積累會嚴(yán)重破壞細胞結(jié)構(gòu)。氧化應(yīng)激在心血管疾病，糖尿病，骨質(zhì)疏松癥，中風(fēng)，炎性疾病，許多神經(jīng)退行性疾病和癌癥中的作用已得到*。 ROS檢測將有助于確定氧化應(yīng)激如何調(diào)節(jié)各種細胞內(nèi)途徑。該使用我們*的Amplite ROS Green熒光定量活細胞中的ROS，Amplite ROS Green具有細胞滲透性。與ROS反應(yīng)時會生成綠色熒光。 Cell Meter 熒光法胞內(nèi)總ROS檢測試劑盒提供了一種靈敏的一步熒光測定法，可在培養(yǎng)一小時后檢測活細胞中的細胞內(nèi)ROS。該試劑盒針對流式細胞儀應(yīng)用進行了優(yōu)化，其信號可以通過Ex / Em = 490/520 nm（FL1通道）進行檢測。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供的Cell Meter 熒光法胞內(nèi)總ROS檢測試劑盒。
適用儀器
| 流式細胞儀 | |
| Ex: | 488 nm |
| Em： | 530/30 nm |
| 通道: | FITC 通道 |
樣品實驗方案
簡要概述
1.準(zhǔn)備密度為0.5-1×106細胞/ mL的細胞
2.在0.5 mL細胞懸液中加入1 µL 500X Amplite ROS Green
3.在37℃下將細胞染色1小時
4.處理細胞以誘導(dǎo)ROS
5.使用帶有FL1通道的流式細胞儀分析細胞（Ex / Em = 490/520 nm）
溶液配制
1.儲備溶液配制
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
Amplite ROS綠色儲備溶液（500X）：將100 µL DMSO（組分C）添加到Amplite ROS Green（組分A）的小瓶中，并充分混合以制成500X Amplite ROS Green儲備液。 避光。 注意：要存放，請密封管。有關(guān)細胞樣品制備的指南，請點擊查看。
操作步驟
1.對于每個樣品，以0.5×105至1×106細胞/ mL的密度在0.5 mL測定緩沖液（組分B）或自備緩沖液中制備細胞。注意：應(yīng)單獨評估每個細胞系，以確定誘導(dǎo)ROS的細胞密度。
2.將1 µL 500X Amplite ROS Green儲備溶液加入0.5 mL細胞懸液中。
3.在37oC下孵育1小時。注意：對于貼壁細胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細胞以保持細胞完整，并在與Amplite ROS Green孵育之前用含血清的培養(yǎng)基洗滌細胞一次。合適的孵育時間取決于所用的單個細胞類型和測試化合物，優(yōu)化每個實驗的孵育時間。
4.通過在所需的緩沖液（例如PBS或HBSS）中添加50 µL 11X測試化合物來處理細胞。對于對照孔（未處的細胞），添加相應(yīng)量的緩沖液。
5.將細胞在37oC下孵育，以誘導(dǎo)ROS（避光）。注意：我們在37℃下用100 µM TBHP（氫過氧化叔丁基）處理Jurkat細胞30分鐘，以誘導(dǎo)ROS。有關(guān)詳細信息，請參見圖1。
6.使用具有FL1通道（Ex / Em = 490/520 nm）的流式細胞儀檢測熒光強度。
