說(shuō)明書
用途：
※用于動(dòng)植物細(xì)胞、細(xì)菌、芽孢或組織的粉碎，從細(xì)胞中提取蛋白質(zhì)以及進(jìn)行病毒、疫苗的科學(xué)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。
※加速化學(xué)、物理學(xué)等的反應(yīng)速度和加速液體脫氣。
※原油稀釋、油水乳化、加速脫晶，玻璃均漿等進(jìn)行的科研分析。
※分散稀土，各類無(wú)機(jī)礦物質(zhì)，以及配制近納米百分之一的乳膠體均化混合物等。
※模具微孔，盲孔的快速?gòu)?qiáng)力高精洗液。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康?br>1、了解超聲細(xì)胞破碎的基本原理
2、掌握超聲細(xì)胞破碎的基本技術(shù)
實(shí)驗(yàn)原理
強(qiáng)聲波作用溶液時(shí)，氣泡產(chǎn)生、長(zhǎng)大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān)，空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。
材料和試劑
細(xì)菌10ml、燒杯、刨冰、75％酒精棉球
| 探頭型號(hào)大小 | 破碎細(xì)胞容量 |
| 2mm | 150ul－5ml |
| 3mm | 200ul－10ml |
| 6mm | 10ml－50ml |
| 10mm | 50ml－150ml |
| 粉碎機(jī),DH97-IIDN基本參數(shù) | |
|---|---|
| 型號(hào) | DH97-IIDN |
| 頻率 | 19.5-20.5KHz |
| 功率 | 400W |
| 隨機(jī)變幅桿 | Φ6 |
| 可選變幅桿 | Φ2、3、6 |
| 破碎容量 | 0.5-400ml |
| 占空比 | 1-99% |
| 電源 | 220/110V 50Hz/60Hz |
| 電源機(jī)箱尺寸 | 400×280×220mm |
| 凈重 | 12.1kg |
| 主機(jī)+換能器重量 | 14.5kg |
| 外包裝尺寸 | 534×295×435mm |
| 產(chǎn)品概述 | |
粉碎機(jī),DH97-IIDN是一種利用強(qiáng)超聲在液體中產(chǎn)生空化效應(yīng)，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行超聲處理的多功能、多用途的儀器，能用于多種動(dòng)植物細(xì)胞、病毒細(xì)胞的破碎，同時(shí)可用來(lái)乳化、分離、勻化、提取、消泡、清洗及加速化學(xué)反應(yīng)等等。被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、微生物學(xué)、藥物化學(xué)、表面化學(xué)、物理學(xué)、動(dòng)物學(xué)等領(lǐng)域。 | |
| 開(kāi)箱清單 | |
| 超聲波發(fā)生器 | 一臺(tái) |
| 振動(dòng)系統(tǒng)(換能器組件) | 一只 |
| 隔音箱 | 一臺(tái) |
| 十字夾（在隔音箱內(nèi)） | 一只 |
| 試管夾（在隔音箱內(nèi)） | 一只 |
| 電源線 | 一根 |
| 專用扳手（用于拆卸變幅桿） | 一套 |
| 保險(xiǎn)絲 8A 、5A | 各2個(gè) |
| 使用說(shuō)明書 | 一份 |
| 合格證 | 一張 |
| 保修卡 | 一份 |
| 溫度探頭 | 一個(gè) |
細(xì)胞破碎的方法:
一、機(jī)械破碎法：是指利用搗碎機(jī)、研磨器或勻漿器 等將細(xì)胞破碎開(kāi)來(lái) 。
1. 高速組織搗碎：將材料配成稀糊狀液，放置于筒內(nèi)約1/3體積，蓋緊筒蓋，將調(diào)速器先撥至最慢處，開(kāi)動(dòng)開(kāi)關(guān)后，逐步加速至所需速度。此法適用于動(dòng)物內(nèi)臟組織、植物肉質(zhì)種子等。
2. 玻璃勻漿器勻漿：先將剪碎的組織置于管中，再套入研桿來(lái)回研磨，上下移動(dòng)，即可將細(xì)胞研碎，此法細(xì)胞破碎程度比高速組織搗碎機(jī)為高，適用于量少和動(dòng)物臟器組織。
二、物理破碎法：指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎開(kāi)來(lái)。
1：用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂(借助超聲的震動(dòng)力破碎細(xì)胞壁和細(xì)胞器）。
機(jī)制：可能與強(qiáng)聲波作用溶液時(shí)，氣泡產(chǎn)生、長(zhǎng)大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān)，空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細(xì)胞裂解。
超聲波破碎的效率取決于聲頻、聲能、處理時(shí)間、細(xì)胞濃度和細(xì)胞類型等。（使用時(shí)注意降溫，防止過(guò)熱）。
2. 高壓破碎：細(xì)胞懸浮液從高壓室的環(huán)狀隙噴射到靜止的撞擊環(huán)上，被迫改變方向經(jīng)出口管流出。此過(guò)程中細(xì)胞經(jīng)歷了高速造成的剪切的碰撞及高壓到常壓的變化，從而破碎釋放內(nèi)含物。
這是一種溫和的、*破碎細(xì)胞的較理想的方法。
3. 反復(fù)凍融法：將細(xì)胞在-20度以下冰凍，室溫融解，反復(fù)幾次，由于細(xì)胞內(nèi)冰粒形成和剩余細(xì)胞液的鹽濃度增高引起溶脹，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎。
三、化學(xué)破碎法：指利用甲醛、丙酮等有機(jī)溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變 。
有些動(dòng)物細(xì)胞，例如腫瘤細(xì)胞可采用十二烷基磺酸鈉（SDS）、去氧膽酸鈉等細(xì)胞膜破壞。濃度一般為1mg/ml。
四、酶學(xué)破碎法 ：選用合適的酶，使細(xì)胞壁遭到破壞，進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎開(kāi)來(lái) 。
細(xì)菌細(xì)胞壁較厚，可采用*處理效果更好。
裂解液標(biāo)準(zhǔn)配方: ：50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml*。(*在這個(gè)pH范圍內(nèi)比較好發(fā)揮作用) 。
綜合敘述：無(wú)論用哪一種方法破碎組織細(xì)胞，都會(huì)使細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中，使大分子生物降解，導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少，加入二異丙基氟磷酸（DFP）可以抑制或減慢自溶作用；加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性，加入苯化物（PMSF）也能清除蛋白水解酶活力，但不是全部，而且應(yīng)該在破碎的同時(shí)多加幾次；另外，還可通過(guò)選擇pH、溫度或離子強(qiáng)度等，使這些條件都要適合于目的物質(zhì)的提取。
使用前注意事項(xiàng)：
1．根據(jù)所處理的樣本體積選擇適當(dāng)探頭，使用前后均須用酒精棉球擦洗探頭，換探頭須剛專用扳手更換;
2．AMPLITUDE旋鈕打開(kāi)時(shí)，探頭不得在空氣中暴露，特殊情況下(測(cè)試探頭)不應(yīng)超過(guò)10秒；
3．使用前準(zhǔn)備好冰盒，樣品處理時(shí)必須置于冰浴中，樣品濃度不可過(guò)大。
