特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：植物銨態(tài)氮測試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
檢測方法：微量法
產(chǎn)品貨號(hào)：BK-01S6498
產(chǎn)品分類：氮代謝系列
商品介紹：
測定意義: 氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素，自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉(zhuǎn)化作用。空氣中的氮?dú)獗还痰⑸锛爸参锱c微生物的共生體固定成氨態(tài)氮，經(jīng)過硝化微生物的作用轉(zhuǎn)化成硝態(tài)氮，后者被植物或微生物同化成有機(jī)氮化物，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。 測定原理 銨態(tài)氮在強(qiáng)堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和作用，生成水溶性染料靛酚藍(lán)，在625nm處有特征吸收峰，吸光值與銨態(tài)氮含量成正比。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、常溫離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、蒸餾水。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
250mL Anticoagulant EDTA Solution（抗凝劑EDTA） Anticoagulant EDTA Solution 常溫保存
50次 DNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)（200-5000bp） DNAMETER 4℃保存
2 ug pGenesil-1.1 SLOOA pGenesil-1.1 SLOOA 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
培養(yǎng)基C(EP標(biāo)準(zhǔn)) 250g
1瓶 EL4細(xì)胞株 EL4 低溫運(yùn)輸和保存
新生 Novobiocin 4.5mg/支*5
50U BAL 31核酸 BAL 31 Nuclease -20℃保存
500mL Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.2 Potassium Phosphate Solution，0.2M, pH7.2 常溫保存
2 ug pIZT/V5-His pIZT/V5-His 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50T 肺炎支原體熒光定量PCR檢測試劑盒（染料法） 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
50mL Western印跡膜抗體清除劑 Western Blot Antibody Erasol 室溫保存
植物銨態(tài)氮測試盒微量法Rabbit Anti-human IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml
Caspr2 軸突相關(guān)CNTP2蛋白抗體（少突膠質(zhì)細(xì)胞） 規(guī)格: 0.2ml
phospho-CK II beta(Ser209) 磷酸化絲/蘇蛋白激II β(casein kinase IIβ)抗體 規(guī)格: 0.1ml
AGPAT1 溶磷脂?；D(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-HER2 (Tyr877) 磷酸化HER2受體抗體 規(guī)格: 0.1ml
Calcitonin 降鈣素抗體 規(guī)格: 0.1ml
C-REL 淋巴細(xì)胞衍生C-型凝集素抗體 規(guī)格: 0.2ml
IAA 吲哚乙酸/植物生素單克隆抗體 規(guī)格: 0.2ml
PPP4C 絲/蘇蛋酸4C抗體 規(guī)格: 0.2ml
SPC25 紡錘體極點(diǎn)構(gòu)成蛋白25抗體 規(guī)格: 0.2ml
LCAT 卵磷酯?；D(zhuǎn)移抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-FAS (Tyr232) 磷酸化載脂蛋白A1抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對(duì)照管，對(duì)照管數(shù)值在什么范圍？
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min）。對(duì)照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對(duì)照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
