本試劑盒僅供研究使用公司實驗室提供免費代測,7個工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
總糖含量測試盒微量法 | 100管/96樣 | 微量法 | BK-01S6767 |
商品介紹：
測定意義: 糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)?？偺且部煞Q為碳水化合物，包括可溶性的單糖，二糖以及不溶性的淀粉，纖維素，幾丁質(zhì)等。 測定原理： 總糖酸水解為還原糖，在NaOH和丙三醇存在下，DNS試劑與還原糖共熱后被還原成氨基化合物，在過量的NaOH堿性溶液中呈桔紅色，在540nm處有最大吸收峰，以此測定樣品中的總糖含量。 需自備的儀器和用品： 可見分光光度計、沸水浴、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液：液體 100 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 5 mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑二：液體 15 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：液體 3 mL×1 瓶，4℃保存。
實驗結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封，并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應(yīng)將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存，其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng)，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒（P1511）測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測。說明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
2 ug pYRP7 pYRP7 低溫運輸，-20℃保存
1mg 羧肽 Y( 酵母 ) Carboxypeptidase Y -20℃保存
2 ug pET-43.1a(+) pET-43.1a(+) 低溫運輸，-20℃保存
金氏B培養(yǎng)基 King’s B medium 250g
1瓶 A549細(xì)胞株 A549 低溫運輸和保存
1套 玻璃勻漿器,10 mL Glass Homogenizer 常溫保存
150次 天凈沙DNA甲基化修飾試劑盒 Embedded Bisulfite Modification Kit ，常溫保存，蛋白K需要-20℃保存。
100mL MOPS Buffer,0.5M,pH8.0 MOPS Buffer,0.5M,pH8.0 常溫保存
100uL 氨芐抗性基因PCR引物 Common PCR Primer -20℃保存
2 ug pMDLg pRRE pMDLg pRRE 低溫運輸，-20℃保存
50 mg Cyclosporin A （免疫抑制劑/PP2B抑制劑） Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
總糖含量測試盒微量法CDK2AP2 細(xì)胞周期素依賴激2相關(guān)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2mlDNAH9 軸絲動力蛋白重鏈9抗體 規(guī)格: 0.2ml
IL-17RB 白介素-17B受體抗體 規(guī)格: 0.1mlRNF23 環(huán)指蛋白23抗體 規(guī)格: 0.2ml
LCE1A 晚期包膜蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
TLR5 Toll樣受體5抗體 規(guī)格: 0.1ml
OPGL/RANKL/ODF 骨保護(hù)蛋白配體抗體(破骨細(xì)胞分化因子) 規(guī)格: 0.1ml
phospho-GSK3 Alpha/Beta(Tyr279+Tyr216) 磷酸化葡萄糖合成激3α/β抗體 規(guī)格: 0.1ml
SIRT3 線粒體乙酰化3抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-Mouse IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Neprilysin 2 腦啡肽2抗體 規(guī)格: 0.2ml
ZNRF2 鋅指/環(huán)指蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
PSAP 鞘脂激活蛋白原抗體 規(guī)格: 0.1ml
TLR1 Toll樣受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml
