原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
睡眠嗜血桿菌PCR檢測試劑盒說明書 | Haemophilus somnusPCR | BK-P9232 |
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實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
補體受體2(CR2)重組蛋白英文名稱：Recombinant Complement Receptor 2 (CR2)
毛狀黃色鏈霉菌 Streptomyces flavopilosus青霉菌 Penicillium sp．
溝腸桿菌 Enterobacter cloacae釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
猴菌 Hericium erinaceusCSC, 小鼠心肌細胞
成人表皮角化細胞*培養(yǎng)基100mL
XLD培養(yǎng)基/XLD瓊脂培養(yǎng)基/木糖賴氨酸脫氧膽培養(yǎng)基/Xylose Lysine Desoxycholate Medium分離志賀氏菌屬和沙門氏菌100克國產(chǎn)/進口
涇陽鏈霉菌 Streptomyces jingyangensis人腎動脈平滑肌細胞*培養(yǎng)基
Y3-Ag 1.2.3(大鼠骨髓瘤細胞)5×106cells/瓶×2
葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarumB16-F10, 小鼠色素瘤高轉(zhuǎn)移細胞
OP9(小鼠骨髓基質(zhì)細胞)GoldCassette-TRX/TRX重組標(biāo)簽蛋白快速檢測試劑盒(裝)
香菇 Lentinula edodes丁香直絲鏈霉菌 Streptomyces lilacinorectus
睡眠嗜血桿菌PCR檢測試劑盒說明書A875/黑色素瘤細胞Plant Protein Extraction Kit/植物蛋白提取試劑盒
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae膠紅酵母 Rhodotorula mucilaginosa
棉小叢殼 Glomerella gossypii黑木耳 Auricularia auricula
人肺大靜脈內(nèi)皮細胞*培養(yǎng)基中分子量單一蛋白Marker（90 kD）
3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞小鼠小腸平滑肌細胞*培養(yǎng)基
鼠桿菌 Lactobacillus murinus木糖葡萄球菌 Staphylococcus xylosus
斯氏假單胞菌 Pseudomonas stutzeri費氏中華根瘤菌 Sinorhizobium fredii
RAG(小鼠腎腺細胞)myc Tag IP/Co-IP Kitmyc標(biāo)簽免疫沉淀試劑盒
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis沙氏桿菌 Lactobacillus sharpeae
根瘤菌 Rhizobium sp.草菇 Volvariella bombycina
SY5Y/神經(jīng)母細胞瘤細胞小鼠膀胱上皮細胞*培養(yǎng)基
植物桿菌 Lactobacillus plantarum大鼠腎足突細胞*培養(yǎng)基
多脂鱗傘 Pholiota adiposa土曲霉 Aspergillus terreus
人心室肌細胞*培養(yǎng)基淡紫擬青霉 Paecilomyces lilacinus
SGC-7901, 人胃腺細胞系Lec1(倉鼠卵巢細胞)
地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis嗜熱脂肪地芽孢桿菌 Geobacillus stearothermophilus
