原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
鵝細(xì)小病毒PCR檢測試劑盒說明書 | Goose Parvoiruvs(GPV)PCR | BK-P9212 |
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實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞英文名稱：OP9
GoldCassette-GST/GST重組標(biāo)簽蛋白快速檢測試劑盒(精裝)2次、10次2次、10次
豌豆瘤菌 Rhizobium leguminosarumRL95-2, 人內(nèi)膜腺細(xì)胞系
人肺腺細(xì)胞Protein A Affinity MagBeads/Protein A 磁性親和純化介質(zhì)
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae熱帶假絲酵母 Candida tropicalis
哥倫比亞血瓊脂基礎(chǔ)/Columbia Blood Agar Base各種細(xì)菌的基礎(chǔ)培養(yǎng)基250克國產(chǎn)/進(jìn)口
人角膜內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
腸道菌增菌肉湯/腸道菌增菌/EE肉湯/Enterobacteria Enrichment Broth腸道菌的增菌培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進(jìn)口
EB-3(人Burkitt淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
Hut-102(人皮膚T淋巴瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
植物桿菌 Lactobacillus plantarumMN-h, 小鼠海馬神經(jīng)元
鵝細(xì)小病毒PCR檢測試劑盒說明書卟啉鈷 791.77 Porphyrin cobalt*：28903-71-1分子量： C48H36CoN4O4
單硬脂酸鋁 344.47 Aluminium stearate*：7047-84-9分子量： C18H37AlO4
鈦粉 47.9 Titanium powder*：7440-32-6分子量： TI
十五烷 288.51 Fifteen benzene*：2131-18-2分子量： C21H36
6-喹喔啉 145.16 Aminoquinoxaline 6-*：6298-37-9分子量： C8H7N3
乙二丁 Ethylene glycol butyl ether 118.17分子量： C6H14O2*：111-76-2
十二氯三鈦鋁 596.12 Twelve chlorine three titanium*：12003-13-3分子量： AlCl12Ti3
2,6-二溴萘 285.96 2,6- dibromine naphthalene*：13720-06-4分子量： C10H6Br2
粘洋紅 Mucus magenta 分子量：*：51395-97-2
4,4',4',4'-四叔丁酞菁銅 4,4 ', 4', 4 '- Tetra tert butyl phthalocyanine copper 800.51分子量： C48H48CuN8*：39001-64-4
土荊皮乙 Soil Jing acid 432.464分子量：C23H28O8*：82508-31-4
