原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
馬輪狀病毒PCR檢測試劑盒廠家 | Equine RotavirusRTPCR | BK-P9145 |
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實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
甾醇 CAS 57-87-4 * 規(guī)格： 20mg
* CAS 58970-76-6 * 規(guī)格： 20mg
萊菔子對照藥材 CAS * 規(guī)格： 1g
款冬 CAS 110042-38-1 * 規(guī)格： 20mg
紅大戟 CAS * 規(guī)格： 3g
延胡索乙素 CAS 6024-85-7 * 規(guī)格： 20mg
刺芒柄花素 CAS 485-72-3 * 規(guī)格： 20mg
* CAS 78110-38-0 * 規(guī)格： 100mg
紫堇靈 CAS * 規(guī)格： 20mg
苦玄參苷IA CAS * 規(guī)格： 20mg
壬二酸 CAS * 規(guī)格： 100mg
右旋糖酐分子量D7 CAS * 規(guī)格： 0.2g/支
癸* CAS * 規(guī)格： 100mg
貝母堿苷（暫行） CAS * 規(guī)格： 20mg
紫萁 CAS * 規(guī)格： 20mg
馬輪狀病毒PCR檢測試劑盒廠家氟替卡松 Fluticasone 500.57分子量： C25H31F3O5S*：90566-53-3
(R,R)-2,2'-異亞丙雙(4--2-惡唑啉) 334.42 (R, R) -2,2'- isopropylidenebis (4- phenyl -2- oxazolinyl)*：150529-93-4分子量： C21H22N2O2
酞菁藍(lán)B Phthalocyanine blue B 576.08分子量： C32H16CuN8*：147-14-8
堿性品紅 Fuchsin 337.85分子量： C20H20ClN3*：632-99-5
丹參酚A Salvia miltiorrhiza phenolic acid A 494.447分子量：C26H22O10*：96574-01-5
羥吳茱萸堿 Hydroxyevodiamine 319.35718分子量：C19H17N3O2*：1238-43-3
3,4,7,8-四甲-1,10-菲羅啉 236.32 3,4,7,8- four methyl -1,10-*：1660-93-1分子量： C16H16N2
鉬酸鉀 238.13 Potassium molybdate*：13446-49-6分子量： K2MoO4
2,5-二三氟甲 176.14 2,5- two amino three fluorine toluene*：364-13-6分子量： C7H7F3N2
5-溴-2,3-二羥吡 190 5- two hydroxy pyridine -2,3-*：34206-49-0分子量： C5H4BrNO2
6-溴-4,4'-二甲-2,2'-雙吡 263.14 6- two -2,2'-*：850413-36-4分子量： C12H11BrN2
