注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理是由一對(duì)引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
 特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

泡盛曲霉變種 Aspergillus awamori var.大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞*培養(yǎng)基

人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞英文名稱：THP-1

PYG體培養(yǎng)基基礎(chǔ)/PYG Broth Base雙岐桿菌增菌培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

人神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞*培養(yǎng)基尖鐮孢

醋酸鉛培養(yǎng)基/乙酸鉛培養(yǎng)基/Lead Acetate Medium用于細(xì)菌的硫氫試驗(yàn)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

人前列腺平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL

膠凍樣芽胞桿菌 Bacillus mucilaginosus佛羅里達(dá)側(cè)耳 Pleurotus florida

B16(小鼠色素瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

沙氏體培養(yǎng)基 規(guī)格： 250g 用途： 用于真菌的增菌培養(yǎng)，還用于一次性使用衛(wèi)生用品真菌定性檢測(cè)

SP Rabbit & Mouse HRP Kit、兔/鼠通用型Streptavidin-HRP試劑盒3ml、18ml國(guó)產(chǎn)

M-TEC瓊脂/M-TEC Agar用于水中耐熱大腸桿菌濾膜計(jì)數(shù)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

黃桿菌通用PCR檢測(cè)試劑盒廠家5-溴甲-3-(4-溴)-異噁唑  254.08  5- methyl bromide -3- (4- Bromophenyl) - isoxazole*：69706-74-7分子量： C10H8BrNO2

4-(2,6-二氯-4-嘧)啉  234.08  4- (2,6- two) Ma Lan*：52127-83-0分子量： C8H9Cl2N3O

2,4-雙-(羥甲)*  180.24  2,4- bis - (Qiang Jiaji) three methyl benzene*：29329-35-9分子量： C11H16O2

2--4-氯-6-甲氧嘧  159.57  2- amino -4- -6- a*：5734-64-5分子量： C5H6ClN3O

乙二胺四乙酸二鈉銅四水合物  397.74  乙二胺四乙酸二鈉銅四水合物*：39208-15-6分子量： C10H12CuN2Na2O8·4H2O

4,6-二氯嘧  148.98  4,6- two*：1193-21-1分子量： C4H2Cl2N2

1-(氯二氟甲)-2-氟  181  1- (trifluoromethyl chloride two) - -2-*：17054-13-6分子量： C7H4ClF3

性媒介PV  Acid medium black PV  382.32311分子量： C16H11N2NaO6S*：2052-25-7

S,S)-(+)-2,2'-BIS[-(N,N-二甲)()甲]-1,1'-雙(二環(huán)己磷)二茂鐵  932.97  S, S) - (+) -2,2'-BIS[- (N, N- two (dimethylamino) methyl]-1,1'- (Ben Ji) - dicyclohexylammonium P Er Maotie)*：793718-16-8分子量： C60H66FeN2P2 10*

3-氯-4-氟三氟甲    3- -4- three f*：78068-85-6分子量： C7H3ClF4

2--4-甲嘧  109.13  2- amino -4-*：108-52-1分子量： C5H7N3

技術(shù)原理：
 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
       在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
       發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對(duì)于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡(jiǎn)捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。