技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動(dòng)子的參與下，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時(shí)也可以發(fā)生變性解鏈，當(dāng)溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計(jì)引物做啟動(dòng)子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個(gè)循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時(shí)也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
腔闊盤吸蟲PCR檢測試劑盒規(guī)格 | Eurytrema coelomaticumPCR | BK-P9155 |
原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動(dòng)植物體外對特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增，經(jīng)過n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴(kuò)增效率＝倍，使得檢測擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
?
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
小鼠艾氏腹水細(xì)胞英文名稱：EAC
50%卵黃水/50%卵黃/50% Egg-Yolk Solution卵黃鈉瓊脂或卵黃瓊脂或甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂的配套試劑50毫升國產(chǎn)/進(jìn)口
粉擬青霉 Paecilomyces farinosus釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞CCD-1095Sk(人腺浸潤性導(dǎo)管旁皮膚細(xì)胞)
低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF1α)重組蛋白英文名稱：Recombinant Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1a)
羊膽/Bile salt from sheepBR25克國產(chǎn)/進(jìn)口
EC肉湯/大腸桿菌檢驗(yàn)肉湯/E.Coli Broth糞大腸菌群、大腸桿菌的檢驗(yàn)250克國產(chǎn)/進(jìn)口
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基
Lysozyme Antibody/溶菌酶100mg國產(chǎn)
中慢生華癸瘤菌 Mesorhizobium huakuiiU251人膠質(zhì)瘤細(xì)胞
G蛋白偶聯(lián)受體家族C5組成員A(GPRC5A)重組蛋白英文名稱：Recombinant G Protein Coupled Receptor, Family C, Group 5, Member A (GPRC5A)
腔闊盤吸蟲PCR檢測試劑盒規(guī)格3,5-二溴吡 236.89 3,5- dibromopyridine*：625-92-3分子量： C5H3Br2N
2,6-二氯-3-吡 173 2,6- two -3- chlorine cyanopyridines*：40381-90-6分子量： C6H2Cl2N2
4-氯-3-三氟甲 306.45 4- -3- three f*：672-57-1分子量： C7H3ClF3I
6-氯-5-氟甲酸吡 175.54 6- chloride -5-*：860296-24-8分子量： C6H3ClFNO2
1--3-三氟甲-5-氯-1H-吡唑 246.6162496 1- 3 -三氟甲- 5 -氯- 1吡唑*：1076197-51-7分子量： C10H6ClF3N2
2-丁-3-(4-羥甲酰)并呋 294.34 2- butyl -3- (4- hydroxy group) benzene and the benzene*：52490-15-0分子量： C19H18O3
2,6-二羥甲 124.14 2,6- two hydroxy toluene*：608-25-3分子量： C7H8O2
4,4'-二(4-吡)聯(lián) 308.38 4,4'- two (4-)*：319430-87-0分子量： C22H16N2
2--4-氯-6-(三氟甲)嘧 197.55 2- amino -4- -6- (three f)*：16097-60-2分子量： C5H3ClF3N3
2-環(huán)己胺乙磺 2- cyclic amino sulfonic acid 207.3分子量： C8H17NO3S*：103-47-9
日落黃 Sunset yellow 452.37分子量： C16H10N2Na2O7S2*：2783-94-0
