技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
流行性出血熱病毒PCR檢測試劑盒價格 | Epizootic Hemorrhagic Disease Virus(EHDV)PCR | BK-P9134 |
原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
Hep G2(人肝細胞)5×106cells/瓶×2
人眼脈絡(luò)色素瘤細胞英文名稱：C918
Hanks’平衡/Hanks’ Balanced Salt solution細胞培養(yǎng)級500毫升國產(chǎn)/進口
AtT-20(小鼠垂體瘤細胞)5×106cells/瓶×2
人腦微血管內(nèi)細胞英文名稱：HBMEC
DHL瓊脂(膽硫瓊脂) 規(guī)格： 250g 用途： 用于腸道致病菌特別是沙門氏菌和志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)。(《中華人民共和國藥典》2010年版)
改良月桂基硫酸胰蛋白月示肉湯(MLST) 規(guī)格： 250g 用途： 用于奶粉中阪崎腸桿菌的檢驗的增菌和分子生物學檢驗方法（PCR）選擇性增菌
HMy2.CIR(人B淋巴母細胞)5×106cells/瓶×2
U-87 MG(人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞)5×106cells/瓶×2
小鼠視網(wǎng)膜muller細胞*培養(yǎng)基IM-9(人外周血B淋巴細胞)
人小氣道平滑肌細胞*培養(yǎng)基棕褐小單孢菌 Micromonospora brunnea
流行性出血熱病毒PCR檢測試劑盒價格新亞甲藍24 New methylene blue 24 347.91分子量： C18H22ClN3S*：1934-16-3
1-(1-甲-4-)嗪 183.29 1- (1- methyl piperidine based -4-) piperazine*：23995-88-2分子量： C10H21N3
己二酸二酰 174.2 Two adipic acid hydrazide*：1071-93-8分子量： C6H14N4O2
環(huán)孢菌素C Cyclosporine C. 1218.61064分子量：C62H111N11O1*：59787-61-0
5-硝喹啉 174.16 5- nitro group*：607-34-1分子量： C9H6N2O2
三亞砜 220.07 Three methyl iodide sulfoxide*：1774-47-6分子量： C3H9IOS； (CH3)3S(I)O
2,4,6-三氟 162.11 2,4,6- three fluorine hydrazine*：80025-72-5分子量： C6H5F3N2
1-戊咪唑 138.21 1- methyl imidazole*：分子量： C8H14N2
次甲綠 Methylene green 433分子量： C16H17ClN4O2S · 0.*：224967-52-6
海索 Trihexyphenidyl hydrochloride 224.6分子量：C7H9ClO6*：52-49-3
介子苷 Black - - - - - - - 415.48分子量：C10H18KNO10S2*：64550-88-5
