技術(shù)原理：
DNA的半保留復(fù)制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復(fù)制成同樣的兩分子挎貝。
在聚合酶鏈式反應(yīng)實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復(fù)性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復(fù)性，并設(shè)計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復(fù)制。（ DNA高溫變性低溫復(fù)性）
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應(yīng)用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術(shù)變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術(shù)得以大量應(yīng)用，并逐步應(yīng)用于臨床。
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
腸粘附性大腸桿菌PCR檢測試劑盒規(guī)格 | Enteroadhesive E.Coli(EAEC)PCR | BK-P9111 |
原理是由一對引物介導(dǎo)，能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增，經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增，擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0＜E＜1,擴增效率＝倍，使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
?
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
Hepa 1-6, 小鼠肝細胞
猴胚胎腎上皮細胞英文名稱：Marc145
Caki-2(人腎透明細胞細胞)5×106cells/瓶×2
粘質(zhì)沙雷氏菌 Serratia marcescens淀粉酶產(chǎn)色鏈霉菌 Streptomyces diastatochromogenes
Glutathione-Triethyleneglycocyl-Sepharose 6B/GST瓊脂糖凝膠鼠傷寒沙門氏菌 Salmonella typhimurium
粘蛋白13(MUC13)重組蛋白英文名稱：Recombinant Mucin 13, Cell Surface Associated (MUC13)
大鼠腎小管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
人原髓細胞白血病細胞英文名稱：HL-60
濾膜腸球菌瓊脂/M-腸球菌瓊脂/M-Enerococcus Agar用于濾膜法或直接平板法，從自來水、食品或其他標本中分離腸球菌250克國產(chǎn)/進口
肌紅蛋白(MYO)重組蛋白英文名稱：Recombinant Myoglobin (MYO)
薔薇痂圓孢霉釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
腸粘附性大腸桿菌PCR檢測試劑盒規(guī)格雙二甲砜 274.38 BIS xylene*：27043-27-2分子量： C16H18O2S
色素(溶) Melanin (alcohol soluble) 分子量：*：11099-03-9
2-溴-5-羥吡 174 2- bromide -5-*：55717-45-8分子量： C5H4BrNO
硒酸鉀 144.08 Potassium selenium*：3425-46-5分子量： CKNSe
小檗堿 Berberine hydrochloride 371.81422分子量：C20H18ClNO4*：633-65-8
2--4-甲-5-硝吡 153.14 2- amino -4- -5-*：21901-40-6分子量： C6H7N3O2
4,5,6,7-四吲唑 122.17 4,5,6,7- four - indazole*：2305-79-5分子量： C7H10N2
石杉堿乙 Stone fir 256.3428分子量：C16H20N2O*：103548-82-9
砷鐵 205.69 Arsenic iron*：12006-21-2分子量： As2Fe
偶氮胂I Arsenazo I 614.28分子量： (HO)2C10H3(SO3R)2N=NC6H*：66019-20-3
1-十六烷-4-甲氯吡鎓水合物 354.02 1- sixteen -4- alkyl methyl pyridinium chloride hydrate*：13106-53-1分子量： C22H40ClN·xH2O
