Applied Cell®Xeno-Free 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基（無酚紅）
產(chǎn)品基本信息
產(chǎn)品簡介
Xeno-Free 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基（無酚紅）是埃澤思生物（Applied Cell®）自主研發(fā)的一款無外源動(dòng)物
成分的人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基?？蓱?yīng)用于人類骨.髓、脂肪、臍.帶等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)，
并保持其多向分化潛能。本產(chǎn)品內(nèi)毒素水平遠(yuǎn)低于中國藥典標(biāo)準(zhǔn)，生產(chǎn)過程遵循ISO9001 體系,并符合 GMP 指導(dǎo)原則。
Xeno-Free 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基主要成分：氨基酸，維生素、無機(jī)鹽、白蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、微量元素，細(xì)胞因子等。
產(chǎn)品特性
? 無外源動(dòng)物蛋白成分，大大降低各類病毒、霉菌和支原體等的污染風(fēng)險(xiǎn)。
? 全程無血清生產(chǎn)，極大降低批次間差異。
? 可用于原代分離，且培養(yǎng)過程無需包被培養(yǎng)板。
? 擴(kuò)增效率高，24h 左右增殖翻倍，節(jié)省培養(yǎng)時(shí)間。
? 內(nèi)毒素<0.06EU/ml，遠(yuǎn)低于中國藥典水
產(chǎn)品內(nèi)容
組分 | 規(guī)格 | 數(shù)量 | 運(yùn)輸 |
Human Mesenchymal Stem Cell Basal Medium 人間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 | 450mL | 1瓶 | 冰袋 |
Human Mesenchymal Stem Cell Supplement 人間充質(zhì)干細(xì)胞添加劑 | 50mL | 1瓶 | 干冰 |
相關(guān)產(chǎn)品
無血清細(xì)胞凍存液（治.療級(jí)）（Applied Cell®: Cat. no.AC-1001006）
人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001003）
人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（Applied Cell®: Cat. no.AC-2001004）
細(xì)胞消化液（Applied Cell®: Cat. no. AC-1001024）
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基配制
1.1. 37℃快速解凍人間.充質(zhì)干.細(xì)胞.培養(yǎng)基添加劑，快速溶解時(shí)不易破壞添加劑中營養(yǎng)物質(zhì)，時(shí)間大致為 10min。
待添加劑融化后搖勻，分裝或直接按比例添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，分裝后添加劑立即儲(chǔ)存于-20℃至-80℃，避免反復(fù)凍融 。
1.2. 將添加劑以 10%比例加入到人間充質(zhì)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混勻，即為人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基
（AC-1001003PRF）?；旌虾笈囵B(yǎng)基可在 2-8℃ 穩(wěn)定儲(chǔ)存 2-3 周，不建議使用已配制超過 3周的培養(yǎng)基。
1.3. 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基可直接應(yīng)用于人類骨.髓、脂肪、臍帶等組織來源的間充質(zhì)干細(xì)胞的原代分離、擴(kuò)增與傳代培養(yǎng)。
操作方法(以下步驟皆應(yīng)在無菌條件下操作)
hMSC細(xì)胞復(fù)蘇(10cm dish)
1.1. 從液氮中取出凍存的 hMSC 細(xì)胞，迅速將凍存管放入 37℃水浴快速融解。
1.2. 在生物安全柜或超凈臺(tái)中，將解凍后的細(xì)胞懸液緩慢加入 5 mL 預(yù)溫的人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基（AC-1001003PRF）。
1.3. 1200rpm 離心 3 min，吸掉上清，加入 10mL 人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
1.4. 將細(xì)胞均勻鋪到培養(yǎng)皿中，水平十字振動(dòng)培養(yǎng)皿使細(xì)胞均勻分布，5% CO2 的 37℃恒溫細(xì)胞培
養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 小時(shí)后觀察細(xì)胞狀態(tài)。
1.5. 24h 后更換新鮮人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每 2-3 天更換培養(yǎng)液。
hMSC細(xì)胞傳代培養(yǎng)
2.1. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到 90%，即可傳代。
2.2. 在超凈臺(tái)/安全柜中，吸掉原有培養(yǎng)基，加入 PBS 溶液清洗一次，加入細(xì)胞消化液（AC-1001024）使之完.全覆蓋皿/瓶底。
2.3. 室溫孵育 4-5 分鐘或 37℃孵育 2-4 分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。
2.4. 加入消化液 2 倍體積的人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基，用移液器輕輕吹打瓶壁上未完.全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，使細(xì)胞完.全分散。
2.5. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到 15 mL 離心管中，1200 rpm 離心 3 min。
2.6. 棄上清，加入人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)。1：3-1：4 比例傳代，或按 1-2x104
cells/cm2傳代，均勻鋪在培養(yǎng)皿/瓶中，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
注意：細(xì)胞傳代所需的時(shí)間：2-4 天。5 代及之前的細(xì)胞，生長速度較快。5 代以后的細(xì)胞，生長速度稍緩。
hMSC細(xì)胞凍存
3.1. 細(xì)胞達(dá)到 90%匯合度， 吸掉原有培養(yǎng)基，PBS 清洗一次。
3.2. 加入細(xì)胞消化液（AC-1001024）使之完.全覆蓋皿/瓶底，室溫孵育 4-5min 或 37℃孵育 2-4min
分鐘，顯微鏡下觀察大部分細(xì)胞脫離皿底即停止消化。
3.3. 加入消化液 2 倍體積的人間.充質(zhì).干細(xì)胞.培養(yǎng)基，用移液槍輕輕吹打瓶壁上未完.全脫離的細(xì)胞，并輕輕吹打混勻，
使細(xì)胞完.全分散。
3.4. 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到 15 mL 離心管中，1200 rpm 離心 3 min，吸掉上清。
3.5. 加入適量無血清細(xì)胞凍存液（治.療級(jí)）（AC-1001006），調(diào)整細(xì)胞凍存密度在 1×106 cells/mL左右，
每支凍存管分裝 1.5-2ml。
3.6. 直接放入-80℃，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中長期保存。
質(zhì)量控制
檢驗(yàn)項(xiàng)目 Test Catagories | 參考數(shù)據(jù) Reference Data |
外觀 Physical Appearance | 無色液體 Colorless Liquid |
澄清度 Clarity | 澄清 Clear |
pH 值 pH Value | 7.0-7.4 |
滲透壓 Osmolality | 270-340 （mosm/KgH2O） |
細(xì)菌內(nèi)毒素 Endotoxin | 小于 0.06 EU/ml |
無菌 Sterility | 無菌 Sterility |
支原體 Mycoplasma | 0.11um 過濾，支原體試驗(yàn)為陰性 The mycoplasma test was negative after 0.11um filtration |
細(xì)胞生長試驗(yàn) Cell Growth Test | 細(xì)胞為梭形，呈指紋狀或螺旋狀生長 The cells are spindle - shaped, fingerlike or spiral |
