中文名：大分子量* (10)
品 牌：QIAGEN
貨 號(hào)：12462
純化至多50 μg BAC、PAC和P1 DNA或至多200 μg的柯斯質(zhì)粒DNA和非基因組DNA
高效去除基因組DNA污染
轉(zhuǎn)染級(jí)別純度的高分子量DNA
快速簡(jiǎn)單的操作
QIAGEN Large-Construct Kit提供重力流和陰離子交換柱，用于純化大分子量的DNA。*的ATP-dependent外切酶消化步驟，確保特異性去除基因組DNA。產(chǎn)物DNA的純度相當(dāng)于經(jīng)過(guò)兩次CsCl密度梯度離心得到的純度，適用于轉(zhuǎn)染級(jí)別的應(yīng)用。
特點(diǎn) | 參數(shù) |
應(yīng)用 | Subcloning, transfection, sequencing etc. |
起始樣本體積 | <500 ml culture volume |
質(zhì)粒類型 | BAC, PAC, P1, cosmid DNA |
處理 | Manual (centrifugation) |
每次處理樣本量；通量 | 1 sample per run |
技術(shù) | Anion-exchange technology |
每次運(yùn)行時(shí)間或處理樣本數(shù) | 280 min |
產(chǎn)量 | <150 ug |
性能
使用QIAGEN Large-Construct Kit純化DNA，無(wú)基因組DNA的污染（參見(jiàn)Efficient removal of genomic DNA）?；蚪MDNA的去除確保準(zhǔn)確可靠的進(jìn)行DNA定量，使一些敏感實(shí)驗(yàn)可在明確的和可重復(fù)的條件下進(jìn)行。
大分子量*原理
QIAGEN Large-Construct Kit使用經(jīng)優(yōu)化的重力流操作，獲得的DNA的純度顯著高于其他常規(guī)方法獲得的DNA的純度。*的ATP-dependent外切酶消化步驟，確保特異性去除基因組DNA。
QIAGEN Large-Construct Kit含有的QIAGEN-tips中*的陰離子交換樹(shù)脂專為核酸純化設(shè)計(jì)。其出色的核酸分離特性可純化得到高純度DNA，相當(dāng)于經(jīng)過(guò)兩次氯化銫梯度離心得到的純度。預(yù)裝的QIAGEN-tips（參見(jiàn)Anion-exchange tips）運(yùn)用重力沉降原理，減少了質(zhì)粒制備過(guò)程所需的手工操作時(shí)間。整個(gè)QIAGEN質(zhì)粒純化系統(tǒng)不使用*、、溴乙錠和氯化銫等有毒物質(zhì)，zui大程度減小了對(duì)使用者及環(huán)境的危害。
操作流程
使用堿裂解法裂解多達(dá)500 ml的培養(yǎng)液后（參見(jiàn)QIAGEN Plasmid Kit procedures），使用試劑盒中的ATP-dependent外切酶進(jìn)行消化，確保特異性去除基因組DNA及缺損的高分子量DNA。之后將樣本上樣至陰離子交換柱，在適當(dāng)?shù)牡望}濃度和pH值條件下，質(zhì)粒DNA與樹(shù)脂特異性結(jié)合。用中等鹽濃度的緩沖液洗滌，去除RNA、蛋白質(zhì)、代謝物和其他小分子的雜質(zhì)。用高鹽緩沖液洗脫已去除基因組DNA的純化質(zhì)粒DNA。加入異丙醇使DNA濃縮和脫鹽，之后離心收集。
應(yīng)用
QIAGEN Large-Construct Kit純化獲得的DNA適用于各種下游應(yīng)用，包括：
亞克隆和制備DNA文庫(kù)
對(duì)高分子量DNA直接進(jìn)行測(cè)序
轉(zhuǎn)染
