whiov-P24C-MoAb細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞必須生活在等滲環(huán)境中,大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞對(duì)滲透壓有一定耐受性。人血漿滲透壓290mOsm/kg, 可視為培養(yǎng)人體細(xì)胞的理想滲透壓。鼠細(xì)胞滲透壓在320mOsm/kg左右。對(duì)于大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞,滲透壓在260-320mOsm/kg的范圍都適宜。
產(chǎn)品名稱:whiov-P24C-MoAb細(xì)胞,雜交瘤細(xì)胞
培養(yǎng)條件:DMEM+15%FBS+1%P/S
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨供應(yīng)
2-3代培養(yǎng)好的:款到后需要培養(yǎng)7-15個(gè)工作日
P1代干冰運(yùn)輸:款到后需要準(zhǔn)備三天左右
細(xì)胞培養(yǎng)室有24h的空氣消毒裝置,但我們還是做的很細(xì),水盤里加的是滅菌水,每次開相時(shí)都時(shí)酒精擦手。當(dāng)然,進(jìn)室之前洗手是肯定的。每星期消毒水擦遍每一個(gè)角落。我們一直很安全?,F(xiàn)在我已經(jīng)在里面做了5、6次原代取材,也沒污染過??傊?xì)胞培養(yǎng)是個(gè)很細(xì)致的事,時(shí)時(shí)小心,問題應(yīng)該不大。
實(shí)驗(yàn)步驟貼壁細(xì)胞:
1.收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度至1000-10000孔,(邊緣孔用無菌PBS填充)。
2.5%CO2,37℃孵育,至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板),加入濃度梯度的藥物,原則上,細(xì)胞貼壁后即可加藥,或兩小時(shí),或半天時(shí)間,但我們常在前一天下午鋪板,次日上午加藥.一般5-7個(gè)梯度,每孔100ul,設(shè)3-5個(gè)復(fù)孔.建議設(shè)5個(gè),否則難以反應(yīng)真實(shí)情況
3.5%CO2,37℃孵育16-48小時(shí),倒置顯微鏡下觀察。
4.每孔加入20ulMTT溶液(5mg/ml,即0.5%MTT),繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng),可先離心后棄去培養(yǎng)液,小心用PBS沖2-3遍后,再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5.終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。
6.每孔加入150ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀OD490nm處測(cè)量各孔的吸光值。
7.同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜),對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)。
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L929 小鼠成纖維細(xì)胞 品牌ATCC 規(guī)格25毫升/株. 貨期1-2周
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L1210 淋巴白血病細(xì)胞 品牌ATCC 規(guī)格25毫升/株. 貨期1-2周
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TA2 自發(fā)高乳腺癌細(xì)胞 品牌ATCC 規(guī)格25毫升/株. 貨期1-2周
SP2/0 骨髓瘤細(xì)胞 品牌ATCC 規(guī)格25毫升/株. 貨期1-2周
U14 宮頸癌細(xì)胞 品牌ATCC 規(guī)格25毫升/株. 貨期1-2周
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